2021届高三一轮复习生物-例析菌落等微生物数目统计计数方法的几个常见问题

高中生物复习高中生物复习- -例析菌落等微生物数目统计计数方法的几个例析菌落等微生物数目统计计数方法的几个 常见问题常见问题 1、从方法上分析菌落数目 例 1 若 要 测 定 培 养 液 中 微 生 物 B 的 菌 体 数 ， 可 在 显 微 镜 下 用直接计数 ;若要测定其活菌数量， 可选用法进行计数。 例 2 Ⅱl 号培养基加入琼脂后可以制成固体培养基，若要以该固体培 养 基 培 养 目 标 菌 并 对 菌 落 进 行 计 数 ， 接 种 时 ， 应 采 用 的 方 法 是。 参考答案 血细胞计数板稀释涂布平板法稀释涂布平板法 显微镜直接计数法是利用显微镜、血细胞计数板等工具对纯培养悬浮 液直接计数来检测样本中的细胞数目。该方法能直观、快速地检测出单细 胞状态下的微生物或丝状微生物所产生的孢子的数目，但是不能区分死细 胞和活细胞，不适合细胞密度低的样品。 稀释涂布平板法常常需要先将样品进行一系列的稀释，然后吸取适量 稀释样品涂布在平板上，在稀释度适宜的情况下一个菌落是由一个活细胞 繁殖形成的，从而通过统计平板上的菌落数来推算活菌数。该方法能灵敏 地检测出样品中的活菌数，但实验过程手续繁、耗时长、影响因素较多。 显微镜直接计数法由于不能区分死菌和活菌，因此计数结果往往比实 际活菌数偏高。为避免把死菌计数在内，可用台盼蓝染色被染成蓝色的为 死菌，反之为活菌。稀释涂布平板法测定活菌数目的时候，由于相邻两个 或多个细胞连在一起，可能形成一个菌落，因此测定值比实际值小。 2、从对照原则上分析菌落数目 例 3若在某次调查中，某一实验组平板上菌落平均数为36 个/平板， 而空白对照组的一个平板上出现了6 个菌落，这种结果说明在此次调查中 出现了现象。若将 30即 36-6个/平板作为本组菌落数的平均值， 该做法填“正确”或“不正确” 。 参考答案∶污染不正确 设置不接种的空白培养基作为空白对照组，证明培养基制备过程中没 有被杂菌污染，增强实验的说服力，保证实验结果的准确性。若该培养基 上出现了菌落则说明实验过程出现污染现象，应舍弃数据，查找原因，重 做实验。 若为了证明选择培养基有选择作用，对照组往往是完全培养基。例如， 为了验证以尿素为唯一氮源的培养基具有选择作用，应以在每个稀释度下 分别接种牛肉膏蛋白豚培养基作为对照组，统计两种培养基的菌落数目。 在相同稀释度下，选择培养基上允许能分解尿素的菌类还可能有土壤中的 自生固氮菌 存活，而牛肉膏蛋白胀培养基上允许土壤中几乎所有菌类都能 生存，因此若牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数比选择培养基的菌落数多﹐则 说明该培养基有选择作用。 3、从重复性原则上分析菌落数目 例 4甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定某一土壤样品中微生物的 数量，在同一稀释倍数下得到以下结果 甲同学涂布了 3 个平板﹐统计的菌落数分别是110、140 和 149，取平均值 133。 乙同学涂布了 3 个平板﹐统计的菌落数分别是27、 169 和 176， 取平均值 124. 有人认为这两位同学的结果中﹐乙同学的结果可信度低，其原因 是 参考答案 正确稀释后涂布平板﹐平板上的菌落数为30300 之间，乙 同学的结果中三个平板的菌落数有一个只有27。 在采用稀释涂布平板法进行计数时﹐必须设置3 个稀释度并且成梯度， 每个稀释度重复3 次以上，取平均值，避免结果的偶然性，使结果更加准 确可靠 24 从实验数据上分析菌落数目平板中菌落数量太少会导致计数误差 太大，菌落数太多会造成计数上的困难，因此国际上通用的菌落计数原则 是以平板上出现 30300 个菌落数的平板为计数标准例。 上述例 4 中，乙同学的结果中三个平板的菌落数有一个只有27，因此 不能用于计数。 若上述乙同学的结果中三个平板的菌落数分别是30、169 和 176，能取 三者的平均值作为实验结果吗对于数据的变异程度﹐最重要的度量方法 是标准差。参照平板菌落数的允许差值如表1 三个平板的菌落数分别是30、169 和 176，平板菌落平均数125 处于 101300 之间，标准差所允许差值为≤ 50，运用标准差公式计数﹐上述例 题标准差为 82，已经超出允许范围。 因此，同一稀释度的3 次重复菌落数处于 30300 的范围内时，若数据 相差较大，超过允许的差值﹐也应舍弃。舍弃数值30 后不足三个平板，也 不能用菌落数为 169 和 176 这两个平板的平均值来推算样品中的活菌数﹐ 而应找出原因并重新实验。菌落数目统计需注意的问题还有很多﹐如稀释 倍数比较小时会导致更多的菌落重叠在一起形成单个菌落，从而导致实验 结果小于稀释倍数大的实验组等情况。 4.4. 微生物计数方法微生物计数方法 二硝基甲苯遇碱变红， 如图表示从被二硝基甲苯污染的土壤中分离具有降解 二硝基甲苯能力的光合细菌球形红细菌的过程。请回答下列问题 1将 10 g 土壤样品加入装有无菌水的三角瓶中制备土壤浸出液。②过程的 目的是____________________；③过程所用的接种方法为______________法。 2在 5 个培养基平板上分别接种稀释倍数为 105的土壤样液 0.1 mL，培养一段 时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为 13、156、462、178 和 191，则每毫升 土壤样液中的细菌数量约为__________________个。 用此方法测定的球形红细菌 数量比实际活菌数量少，原因是_________________________________。 3 图 中 甲 、 乙 培 养 基 需 置 于 有 光 条 件 下 培 养 ， 主 要 原 因 是 ____________________。挑出纯化获得的菌落接种在含二硝基甲苯的培养基中， 培养结束后， 可通过____________________________________________来判断菌 种降解二硝基甲苯的能力。 解析1图中②稀释涂布平板接种的目的是获得单个菌落；由图中菌落的分布 可知，③过程所用的接种方法为平板划线法。 （2）在 5 个培养基平板上分别接种稀释倍数为 105的土壤样液 0.1 mL，培养一 段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为 13、156、462、178 和 191，一般取 菌落数在30～300 之间的平板计数， 则每毫升土壤样液中的细菌数量为 156＋178 ＋19131050.1＝1.75108个。用此方法测定的球形红细菌数量比实际活菌数 量少，原因是一个菌落可以由一个或多个球形红细菌形成。 3由于球形红细菌进行光合作用需要光，因此图中甲、乙培养基需置于有光条 件下培养。 挑出纯化获得的菌落接种在含二硝基甲苯的培养基中，由于二硝基甲 苯遇碱变红，因此培养结束后，可通过调节培养基的pH 至碱性后观察培养基颜 色来判断菌种降解二硝基甲苯的能力。 答案 1获得单个菌落平板划线21.75108一个菌落可以由一个或多个 球形红细菌形成3球形红细菌进行光合作用需要光调节培养基的 pH 至碱 性后观察培养基颜色 拓展 微生物计数方法 间接计数法 稀释涂布平板