BD流式细胞仪

目录 简介流式细胞仪3 流式细胞仪的临床检验项目 淋巴细胞亚群分析4 肿瘤细胞 DNA 检测分析5 白血病及淋巴瘤免疫分型6 残余白血病检测6 网织红细胞计数7 造血干细胞计数7 血小板疾病及活化血小板检测8 HLA-B27 检测8 器官移植的配型及免疫状态监控9 AIDS 诊断及治疗监控.9 流式细胞仪的临床/医学研究10 流式细胞技术的发展及国内现况.10 建议流式细胞仪之机型----BD 公司 FACSCalibur 仪器主要特点11 配套设施（计算机、软件、试剂、样本制备仪、售后服务）12 仪器主要技术参数15 BD 公司全球及中国业务介绍 BD 公司流式细胞仪培训计划 BD 公司推荐配置单 BD 公司仪器与其他厂家仪器比较表 一、简介流式细胞仪 . （一）流式细胞仪概念（一）流式细胞仪概念 流式细胞术（Flow Cytometry ，FCM）是一种对处在液流中的细胞或其它生物微粒 （如细菌）逐个进行多参数的快速定量分析和分选的技术。 简言之，流式细胞仪是测量染色细胞标记物荧光强度的细胞分析仪，是在单个细胞 分析和分选基础上发展起来的对细胞的物理或化学性质，如大小、内部结构、DNA、 RNA、蛋白质、抗原等进行快速测量并可分类收集的高技术，FCM 以其快速、灵活、大 量、灵敏和定量的特色，广泛应用于基础研究和临床实践各个方面，包括细胞生物学、 肿瘤学、血液学、免疫学、药理学、遗传学及临床检验学等，在各学科领域发挥着重要 的作用。 （二）原理（二）原理 待测样本的细胞悬液，在鞘液的包围和约束下，细胞排成单列高速由流动室喷嘴喷 出，形成细胞液柱。当液柱通过检测区，在入射的激光束照射下产生前向散射光（FSC） 和侧向散射光（SSC），它们分别反映细胞大小和颗粒度，根据这些特性可以将细胞分 类。经一种或几种特殊荧光标记的样本，在激光束的激发下所产生的特定荧光，可被光 学系统检测并输送到计算机进行分析，得到细胞相应的各种特性。 （三）流式细胞仪检测的细胞特性（三）流式细胞仪检测的细胞特性 细胞结构组成细胞结构组成 大小 粒度 DNA、RNA 含量 蛋白质含量 钙离子、pH 值、膜电位 细胞功能细胞功能 细胞表面、胞浆、核特异性抗原 细胞活性 胞内细胞因子 激素结合位点 酶活性 二、二、 流式细胞仪的临床检验项目流式细胞仪的临床检验项目 目前在国内最常见的临床应用有两大类一为肿瘤细胞的 DNA 含量析； 另一为细胞表面的表型测定，包括淋巴细胞亚型分析、免疫功能监测、白血病和淋巴瘤 免疫分型、残余白血病检测、以及 HLA-B27 组织抗原检测等等。 1 1、淋巴细胞亚群分析、淋巴细胞亚群分析 淋巴细胞亚群分析可以通过相对计数、绝对计数与率的变化监控疾病状态下的免疫状 况（如肿瘤、感染性疾病、免疫性疾病等），以此辅助诊断、追踪病情发展及决定用药 时机。 . . 检测原理利用各种单克隆抗体与淋巴细胞表面的抗原结合，再配合多色荧光染料， 即可以把各种不同功能的淋巴亚群区分开来，进而得到各亚群的相对比例。最常检测的 亚群包括 T 细胞（CD3）、B 细胞（CD19）、NK 细胞（CD1656）、辅助性 T 细胞 （CD3CD4）和抑制性 T 细胞（CD3CD8）等。 应用实例SimulSET 系统利用 CD14/CD45 设门技术精确检测淋巴细胞亚群比例。 * 其中绿色细胞群体为淋巴细胞，红色为单核细胞，蓝色为粒细胞。 2、DNADNA 分析分析 肿瘤细胞的DNA倍体分析是流式技术另一重要应用，临床上可对一些恶性肿瘤进行早 期诊断，跟踪随访和早期治疗，大大提高一些肿瘤的治愈率和生存率。 检测原理正常人体细胞的DNA含量是二倍体，细胞群体具有特定的增殖比例。通过 检测细胞的DNA含量和增殖比例，可以了解细胞群体的倍体性和增殖能力。具体操作时， 先将实体组织制备成单细胞悬液，用固定或去污剂在细胞膜上打孔，使DNA特异的荧光染 料如PI（碘化丙啶）导入细胞核，PI和DNA缄基对特异结合后上机检测PI的荧光强度，并 进行数据分析。 应用实例乳腺癌病人的手术标本分析图。 . . *其中红色群体为二倍体，黄色群体为异倍体。 3 3、、白白血血病病和和淋淋巴巴瘤瘤免免疫疫分分型型 正常白细胞在其分化过程中，随着系列的不同、成熟阶段的差异，会在细胞膜表面表 达不同的分化抗原。白血病细胞则在癌变的过程中，丧失了正常细胞底系列专一性和分 化阶段规律性，在本质上有别于正常骨髓细胞。应用此特点可进行免疫表型分析，以鉴 别各种白血病和淋巴瘤，辅助临床诊断、评估疗效和预后。 常用的抗原包括CD3、CD5、CD7、CD19、CD20、CD22、CD10、HLA-DR、 CD13、CD14、CD33、CD34、GLY-A、MPO等等。 应用实例利用CD45三色分析急性髓性白血病。 *左图为正常骨髓，绿色为正常淋巴细胞，深红为单核细胞，玫瑰红为成熟粒细胞，浅蓝为有核 红细胞，深蓝为未成熟细胞；右图为急性髓性白血病图形，可见与正常明显的差别。 4 4、、残余白血病检测残余白血病检测 残余白血病是指经过适当的治疗、疾病缓解后仍残留在病人血中的极少量白 血病细胞。通常白血病病人经过化疗后的疾病复发率为 60-80，经过自体或异体骨髓移 植后的复发率仍偏高（20-50）。所以如果能早期检测到复发的迹象，即白血病细胞的 再增生，则可以提前给予病人及时恰当的治疗。 依照不同的白血病，选用不同的抗体组合（如下表）来检测残余白血病。流式细胞术 可在一万个骨髓细胞中检测到一个白血病细胞；尤其是 TdT 的应用大大提高了检测灵敏 度。 白血病种类白血病种类 T-ALL B-ALL Pre-B-ALL . 可选择的抗体组合可选择的抗体组合 cyto CD3/TdT CD13/TdT，CD33/TdT cyto μ/TdT . AMLCD13/TdT， CD33/TdT， CD7/TdT 5 5、网织红细胞分析、网织红细胞分析 网织红细胞计数是骨髓红细胞造血功能的重要指标。传统手工计数耗时耗力，缺乏准 确性。流式细胞仪网织红细胞计数系统由于采用系统试剂与全自动软件，可在短时内分 析大量细胞，低水平网织红细胞也可达到统计分析精度，省时省力，结果正确可靠。 * 左图中红色群体为红细胞，右图利用RNA染料噻唑橙（TO）区分成熟红细胞和网织红细胞。 6 6、造血干祖细胞检测、造血干祖细胞检测 在治疗恶性血液病时，大剂量化疗或放疗摧毁