质谱的几种工作模式：SIM_SRM_MRM

质谱都有几种工作模式质谱都有几种工作模式SIM,SRM,MRMSIM,SRM,MRM SIM 单离子检测扫描single ion monitoring SRM 选择反应检测扫描selective reaction monitoring MRM 多反应检测扫描multi reaction monitoring 质谱都有几种工作模式 （1）Full Scan全扫描，指质谱采集时，扫描一段范围，选择这个工作模式后，你自己来 设定一个范围，比如150～500 amu。 对于未知物，一定会做这种模式，因为只有Full Scan 了，才能知道这个化合物的分子量。 对于二级质谱 MS/MS 或多级质谱 MSn 时，要想获得所有的碎片离子，也得做全扫描。 （2）SIMSingle Ion Monitor，指单离子监测，针对一级质谱而言，即只扫一个离子。 对于已知的化合物，为了提高某个离子的灵敏度， 并排除其它离子的干扰， 就可以只扫描一 个离子。这时候，还可以调整一下分辨率来略微调节采样窗口的宽度。比如，要对500 amu 的离子做 SIM，较高高分辨状态下，可以设定取样宽度为，这时质谱只扫～ amu。还有些 高分辨率的仪器，可以设定取样宽度更小，比如 amu，这时质谱只扫～ amu。但对于较纯 的、杂质干扰较少的体系，不妨设定较低的分辨率，比如取样宽度设为2 amu，这时质谱扫 描 499～501 amu，如果没有干扰的情况下，取样宽度宽一些，待测化合物的灵敏度就高一 些，因为噪音很低；但是有很强干扰情况下，设定较高分辨，反而提高灵敏度信噪比，因为 噪音降下去了。 （3）SRMSelective Reaction Monitor，指选择反应监测，针对二级质谱或多级质谱的某两 级之间，即母离子选一个离子， 碰撞后，从形成的子离子中也只选一个离子。因为两次都只 选单离子，所以噪音和干扰被排除得更多，灵敏度信噪比会更高， 尤其对于复杂的、基质背 景高的样品。 我们不妨把它看成二级质谱的SIM，上述关于 SIM 的特点也适用，即分辨率高些，抗背景排 干扰的能力就更强。 （4）MRMMulti Reaction Monitor，指多反应监测，其实就是多个化合物同时测定时，多 个 SRM 一起做。 那么特点就跟 SRM 是一样的。有的厂家并不区分SRM 和 MRM，因为只要一次实验同是做 几个 SRM 就是 MRM 方式了。 定性，一定会用 Full Scan，因为想看到更多的离子。 定量， 倾向于用 SIM 或 SRM/MRM， 因为想提高已知信号的强度。 背景基质越复杂， SRM/MRM 就越好，尤其是分辨率设得高的SRM/MRM 就越好。 一级质谱有的时候受仪器的分辨率影响， 给出的质荷比不能准确定性， 比如相同分子量的不 同分子， 在仪器分辨率不够足够高的时候很难区分。 串联质谱利用它们不同分子碎裂的碎片 不同来定性，并可以多级串联， 直到你认为可以准确定性为止，当然也受一定条件影响。这 些你可以去参考一些专业的质谱书，上面都有讲解的。 haotea430站内联系 TA 受质谱的分辨率的影响， 通俗的讲现在有些分辨率高的质谱分子量可以精确到小数点后面四 位， 所以它对目标物质定性的准确性就高些了， 二级质谱就是在一级的基础上将目标物质打 成碎片，以求进一步定性。 nritw站内联系 TA 首先要清楚你说的准确的含义。 如果你说的是准确测定分子量， 那只能是一级质谱，也就是 测定准分子离子峰，准确性和分辨率有关，你会看到有高分辨质谱， 比如飞行时间甚至回旋 轨道等。如果你说准确测定结构，那只有质谱往往是不够的， 还需要红外，紫外和核磁共振 信息。所谓二三级质谱就是把上一级质谱中某个离子单独挑出来， 再打碎，看碎片情况，这 可以提供一定的结构信息。 所以对于串联质谱， 就需要一个质量分析器挑， 后一个质量分析 器测碎片，这就是最常见的qqq。但是没听说串联很多个打到三级四级的，这个工作可以由 离子阱来做，你可以查查相关资料 龙井不苦 站内联系 TA 4 楼 Originally posted by nritw at 2011-09-24 1125 首先要清楚你说的准确的含义。 如果你说的是准确测定分子量， 那只能是一级质谱，也就是 测定准分子离子峰，准确性和分辨率有关，你会看到有高分辨质谱， 比如飞行时间甚至回旋 轨道等。如果你说准确测定结构，那只有质 . 你说的串联是不同的质谱，你说的QQQ 一般是三重四级杆质谱，质量分析器就是四级杆； 串联质谱还有 Q-TOF，前面也是用四级杆选择离子，然后送入飞行时间质量分析器；离子阱 质谱是可以做多级串联的质谱，LTQ线性离子阱质谱理论可以无限做多级串联质谱，一般认 为极限可以做到 30 级以上。当然 FT-MS也可以进行离子选择，进行多级串联。 一级质谱鉴定的方式主要指胎指纹图谱（PMF） ，即利用质谱仪精确测量酶解片段的分子量 并搜库比较实现蛋白质的鉴定， 二级质谱是在一级质谱的基础上再选择部分肽段做进一步的 破碎并对碎片进行深入分析和比较，鉴定出该肽段的序列并结合PMF 的结果从而实现蛋白 质的鉴定。二级质谱能够得到部分肽短的序列， 具有更高的可靠性。随着现在杂志对数据的 要求越来越严格， 二级质谱鉴定是蛋白鉴定的大趋势， 而且即使目前做一级质谱鉴定的结果， 也需要挑选部分 PMF 结果做二级质谱验证。 2. 2. 研究的物种不是模式生物怎么办研究的物种不是模式生物怎么办 答 可以参考亲缘关系最近的模式生物做比对而实现蛋白质的成功鉴定， 如果质谱图很好而 没有鉴定结果说明这是一个全新的蛋白，可以采用de-novo 等技术做深入分析与鉴定。 3. 3. 该如何评价质谱效果的好坏该如何评价质谱效果的好坏 答做 PMF 一般得分超过 60 分（P）就算成功鉴定，而串联质谱，得分超过60 分或者虽 然没有超过 60 分，但是有最少一条肽段的得分超过30 分就算成功鉴定。 4. 4. 一些特殊的质谱方法有什么用途一些特殊的质谱方法有什么用途 答质谱的其它用途包括磷酸化位点分析、蛋白测序、混合蛋白鉴定（shotgun 技术）以及 分子量精确测定、二硫键位置分析等等。 5. 5. 用什么染色方法比较好用什么染色方法比较好 答最好用考马斯亮蓝法进行染色， 银染也可以，但鉴定成功率稍低，并且推荐用串联质谱 对银染蛋白进行鉴定可以大大提高鉴定成功率。 6. 6. 凝胶是否可以长期保存该如何保持对鉴定效果有影响吗凝胶是否可以长期保存该如何保持对鉴定效果有影响吗 答如果保存时间超过一个月， 可以用保鲜膜包裹后放入冰箱保持，如果小于一个月， 则可 以常温保持，不会影响质谱鉴定效果。 7. 7. 质谱鉴定取胶点该如何取有什么注意事项质谱鉴定取胶点该如何取有什么注意事项 答取点的时候将的枪头前端剪去一点， 用枪头将凝胶戳取下来并转移至离心管中， 用水将 胶粒反复吸打冲洗两至三次， 最后吸干离心管中所有水分封盖保存。 离心管最好用进口离心 管，以免塑料污染； 水最好用去离子水或者双蒸水；取点的时候带好口罩与手套， 以免角蛋 白污染。