试验十三包合物的制备及其验证

沈阳药科大学 实验十六 包合物的制备及其验证 药剂学实验 实验十六实验十六 包合物的制备及其验证包合物的制备及其验证 一．一．实实验目的验目的 1．掌握饱和水溶液法制备包合物的工艺。 2．掌握包合物形成的验证方法。 二．二．实实验指导验指导 包合技术系指一种分子被包嵌于另一种分子的空穴结构内，形成包合物 （inclusioncompound）的技术。这种包合物是由主分子（hostmolecule）和客分 子（guestmolecule）两种组分加合组成，主分子具有较大的空穴结构，足以将客 分子容纳在内，形成分子囊（moleculecapsule） 。 目前，常用包合物的主分子以环糊精（ CYD）为最多。环糊精系淀粉用嗜碱性 芽孢杆菌经培养得到的环糊精葡聚糖转位酶（ Cyclodextringlucanotransferase）作 用后所形成的产物。是由 610 个 D-葡萄糖分子以 1，4-糖苷键连接面成的环状低聚 糖化合物。 环糊精为水溶性、 非还原性的白色结晶性粉末。 常见的有α-、 β-、 γ-CYD 三种，分别由 6，7，8 个葡萄糖分子构成。 药物作为客分子经包合后，溶解度增大，稳定性提高，液体药物可粉末化，可 防止挥发性成分挥发，掩盖药物的不良气味或味道，调节释药速率，提高药物的生 物利用度，降低药物的刺激性与毒副作用等。 符合下列条件之一的有机药物，通常都可以与环糊精包合成包合物药物结构 中的原子数大于 5 个且药物的稠环小于 5 个；药物分子量在 100400 之间；药物在 水中的溶解度小于 10mg/ml； 药物的熔点低于 250℃。 也有药物符合上述条件而不能 与环糊精包合的，如几何形状不合适；也有因环糊精用量不合适而不能包合的。无 机药物大多数不宜与环糊精包合。 环糊精包合物的制备方法很多， 有饱和水溶液法、 研磨法、喷雾干燥法、冷冻干燥法以及中和法等，其中以饱和水溶液法（亦称重结 晶法或共沉淀法）为最常用。 包合物根据主分子的构成可分为多分子包合物、单分子包合物和大分子包合 物；根据主分子形成空穴的几何形状又分为管形包合物（channel 或 tunnel inclusion compound） 、 笼形包合物 （chathrate 或 cage inclusion compound） 和层状包合物 （layer 74 沈阳药科大学 实验十六 包合物的制备及其验证 药剂学实验 inclusion compound） 。 本实验的客分子为莪术挥发油， 具有较强的挥发性， 临床证明具有抗肿瘤作用。 莪术醇是莪术油中抗癌有效成分。现有莪术油静脉注射液及乳剂等剂型，但稳定性 较差，对光敏感，强光下易分解。将莪术油制成包合物后，可减少莪术油的挥发， 使液态油状态改变成固体粉末，便于配方，还可具有缓释作用。 三、实验内容与操作三、实验内容与操作 （一）莪术挥发油（一）莪术挥发油- -β环糊精包合物的制备β环糊精包合物的制备 1．莪术挥发油的制备 将莪术粉碎成中等粉末，取 200g，加入 10 倍量的蒸馏水，经挥发油提取器提 取 3.0 小时，得棕褐色油状液体，用无水硫酸钠脱水后，即得莪术挥发油，备用。 2．莪术挥发油乙醇溶液的制备 精密吸取莪术挥发油 1ml，加无水乙醇 5ml，溶解，即得，备用。 3．β-环糊精饱和水溶液的制备 称取β-环糊精 8g，置烧杯中，加蒸馏水 100ml，在 601℃条件下制成饱和水 溶液，保温，备用。 4．莪术挥发油-β环糊精包合物的制备 将β-环糊精饱和水溶液 100ml 置烧杯中，于磁力搅拌器上，60℃恒温，另精密 吸取莪术油乙醇液 5ml，缓慢滴入到60℃的β-环糊精饱和水溶液中，不断搅拌，并 用 5ml 无水乙醇洗涤移液管，同时将洗涤液滴入到β -环糊精饱和溶液中。待出现浑 浊逐渐有白色沉淀析出，继续搅拌 4 小时（本实验中为掌握方法，可暂定搅拌1 小 时） ，停止加热，继续搅拌至室温，最后置冰箱中放置 12 小时（实验中也可用冰浴 冷却） ，待沉淀析出完全后，抽滤，用无水乙醇5ml 洗涤三次，抽滤至干，50℃以下 干燥，称重，计算收得率。 （二）包合物形成的验证方法（二）包合物形成的验证方法 1．薄层色谱法（TLC） ⑴ 硅胶 G 板的制作 将 1 份固定相（硅胶G）和3 份含有 0.5CMC-Na 的水溶液在研钵中向一方向 研磨混合，去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动斜面器进行涂 布（厚度为0.20.3mm） ，取下涂好薄层的玻板，置水平台上于室温下晾干，然后在 75 沈阳药科大学 实验十六 包合物的制备及其验证 药剂学实验 110℃活化 30 分钟，取出后立即置有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度 （可通过透射光和反射光检视） 。 ⑵ 样品液的制备 ① 莪术挥发油样品液的制备（A） 精密吸取莪术挥发油 0.5ml，加无水乙醇9.5ml，溶解，即得，备用。 （0.05μl 油 /μl 乙醇） 。 ② 莪术挥发油-β环糊精包合物样品液的制备（B） 精密称取包合物适量（相当于含有0.5ml 莪术挥发油的量） ，加无水乙醇9.5ml， 振荡，取上清液，备用。 ⑶ TLC 条件 用微量进样器精密分别吸取样品液A、B 各 10μl，点于同一硅胶 G 板上，以石 油醚乙酸乙酯（91）为展开剂，展开前将板置展开槽中饱和10 分钟，上行展开， 展距 15cm，1香草醛浓硫酸液为显色剂，喷雾烘干显色。 2．差热分析（DTA） ⑴ 样品的制备莪术挥发油为样品 a，β-环糊精为样品 b，包合物为样品 c，按 包合物中的比例量称取莪术挥发油与β-环糊精， 制成莪术挥发油与β-环糊精的混合 物为样品 d。 ⑵ DTA 条件测定气 N2为 40ml/min，量程为100uV，升温速度为 10℃/min， 走纸速度 600mm/h，样品与参比物的称量大致相等。 （三）莪术油（三）莪术油- -β环糊精包合物中含油量的测定β环糊精包合物中含油量的测定 1．精密量取莪术油 1ml，置圆底烧瓶中，加蒸馏水 100ml，用挥发油测定法提取 莪术油，并计量。 2．称取相当于 1ml 莪术挥发油的包合物置圆底烧瓶中，加水100ml，按上述方法 提取莪术挥发油并计量。 根据所测数值，利用下述公式计算包合物的含油率、利用率及收得率。 含油率 包合物中实际含油量g 100 包合物量g （1） 包合物中实际含油量ml 利用率 100 投油量 ml （2） 包合物收率100 （3）  环糊精 g  投油量 g 76 包合物实际量g 沈阳药科大学 实验十六 包合物的制备及其验证 药剂学实验 （四）含量测定（紫外分光光度法）（四）含量测定（紫外分光光度法） 1．对照品溶液的制备 精密称取莪术醇 250mg， 置 25ml 量瓶中， 加无水乙醇溶解并定容至刻度， 摇匀， 精密吸取其 1ml，置 50ml 容量瓶中，加 10聚山梨酯-80 1ml，用无水乙醇定容至刻 度（0.2mg/ml） 。 2．样品溶液的制备 ⑴莪术挥发油样品液的制备 精密量取莪术挥发油 0.1ml，置 25ml