DB41_T 2761-2024 淡水常见经济绿藻规模化生产技术规范

ICS 65.150 CCS B 52 41 河 南 省 地 方 标 准 DB41/T 27612024 淡水常见经济绿藻规模化生产技术规范 2024 - 10 - 10 发布 2025 - 01 - 09 实施 河南省市场监督管理局 发 布 DB41/T 27612024 目 次 前言 II 1 范围 3 2 规范性引用文件 3 3 术语和定义 3 4 培养要求 4 5 一级培养 4 6 二级扩大培养 5 7 规模化生产 5 8 采收 6 9 保藏 6 10 生产记录 7 附录 A（资料性） 简化 BG11 培养基配方 8 参考文献 9 I DB41/T 27612024 前 言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分标准化文件的结构和起草规则的规定 起草。 请注意本文件某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由河南省农业农村厅提出。 本文件由河南省渔业标准化技术委员会（HN/TC 36）归口。 本文件起草单位河南师范大学、河南省水产技术推广站、河南省水产科学研究院。 本文件主要起草人张曼、王先锋、郜小龙、许欢欢、吴小军、胡建平、杨博、吕绪聪、张圆圆、 赵道全、张开松、吴丽莉。 II DB41/T 27612024 淡水常见经济绿藻规模化生产技术规范 1 范围 本文件规定了淡水常见经济绿藻规模化生产的培养要求、一级培养、二级扩大培养、规模化生产、 采收、保藏和生产记录等内容。 本文件适用于生产单位淡水常见经济绿藻的自养规模化生产。常见经济绿藻种类有小球藻 （Chlorella）、栅藻（Scenedesmus）、卵囊藻（Oocystis）等属中的种类。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6920 水质 pH值的测定 GB 11607 渔业水质标准 NY/T 5361 无公害产品 淡水养殖产地环境条件 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 活化藻种 将处于休眠状态的藻种放入适宜的培养基中活化，得到无菌的活性藻种。 3.2 一次性培养 将藻类接种于培养基并培养至峰值密度后，一次性收获的培养方式。 [来源SC/T 20472006，3.6，有修改] 3.3 半连续培养 将藻类接种于培养基并培养至峰值密度后，一部分藻液用于收获，另一部分被保留在培养容器中继 续培养的方式。 [来源SC/T 20472006，3.7，有修改] 3.4 无菌培养 在灭菌条件下进行的藻种纯培养。 3.5 单种培养 有细菌共存条件下的单一藻种培养。 [来源SC/T 20472006，3.4，有修改] 3 DB41/T 27612024 4 培养要求 4.1 环境 应符合NY/T 5361的规定。 4.2 水质 应符合GB 11607的要求。 4.3 场地及设备 4.3.1 场地条件 应具备室外场地、藻种保藏室、一级培养室、二级培养场、规模化生产场和清洗灭菌室等6个功能 分区。 4.3.2 室外场地 应建有室外储水池、沉淀池、砂滤罐、加热罐，以及所需的输水管道。 4.3.3 藻种保藏室 应配备放置固体斜面或液体藻种的光照培养架，空调、冰箱或液氮罐。 4.3.4 一级培养室 应配有光照通气培养架、超净工作台、控温条件设施、分光光度计、显微镜、pH计等。 4.3.5 二级培养场 应建有阳光房、控温设施、进水和排水管道，配备100 L～500 L密闭玻璃柱或100 L～500 L开放式 塑料桶或100 L～500 L开放式水族箱、通气装置、二氧化碳装置等。 4.3.6 规模化生产场 应具备控温设施、进水和排水管道等，配备二氧化碳装置、密闭式光生物反应器或开放式培养池配 备搅拌装置等。 4.3.7 清洗灭菌室 应配备高压灭菌锅、清洗水槽、烘箱等。 5 一级培养 5.1 培养基配制 按BG11蓝绿藻培养基配方配制培养基，加入250 mL、1 L或5 L的锥形瓶，加盖防尘膜，高压灭菌锅 121 ℃灭菌30 min。 5.2 接种 4 DB41/T 27612024 选择细胞完整、无破碎，细胞内含有明显色素体的纯化藻种进行接种。在超净工作台上按接种浓度 20的量，将藻种转接于已灭菌的三角瓶中，加盖防尘膜后，放置在光照培养架上连续培养7d左右。当 藻液颜色变为翠绿色后，再将藻种逐步扩培，直至获得二级扩大培养所需的液体量。 5.3 培养 采用无菌培养。放置于光强为1 000 lux～3 000 lux的光照通气培养架上，使用全光谱灯光光源， 通入经0.22 μm规格的滤膜过滤后的加富0.5～1二氧化碳的空气，进行通气培养；控制水温在22 ℃ 28 ℃范围内。藻细胞密度达到峰值密度后，获得活化藻种。 6 二级扩大培养 6.1 容器消毒 选用100 L～500 L容器进行消毒及培养。 次氯酸钠法或二氧化氯法使用有效氯浓度为0.1‰～0.3‰的次氯酸钠或二氧化氯溶液浸泡消毒 24 h，用蒸馏水冲洗至余氯检测值低于0.05 mg/L。 高锰酸钾法当发生病虫害后采用全面消杀，使用10 mg/L～20 mg/L的高锰酸钾溶液浸泡30 min 进行消毒，用蒸馏水清洗干净。 6.2 培养基配制 采用BG11配方，用水应符合GB 11607规定。经过砂滤系统去除水体中颗粒物质和水生生物，加入有 效氯浓度为0.3‰的次氯酸钠灭菌，采用25 g/m3硫代硫酸钠（Na2S2O3）中和余氯，检测余氯低于0.05mg/L 后方可用于培养基配制。 6.3 接种 将活化好的藻种按照不低于培养体积10的比例进行接种，接种时间选取在上午800～1000为宜， 接种时活化藻种与二级培养的培养基温差小于5 ℃。 6.4 培养 采用单种培养，使用管道式或平板式密闭培养器、培养槽或培养桶进行。充入加富0.5～1二氧化 碳的空气进行通气培养，通气开口接入培养容器底部，充气量确保藻液均匀悬浮。控制光照强度 3 000 lux ～5 000 lux，温度22 ℃28 ℃ , 培养7 d～10 d，藻细胞密度达到峰值浓度后可转入规模 化生产。