DB15_T3717-2024枣组织培养育苗技术规程

ICS 65.020.20 CCS B 61 15 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 37172024 枣组织培养育苗技术规程 Code of practice for seedling cultivation by tissue culture in ziziphus jujuba 2024-11-15 发布 2024-12-15 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发 布 DB15/T 37172024 前 言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分标准化文件的结构和起草规则的规定 起草。 本文件由内蒙古自治区林业和草原局提出并归口。 本文件起草单位内蒙古农业大学、内蒙古蒙枣科技有限公司。 本文件主要起草人白玉娥、张胜利、格根珠拉、李孔、代金玲、包文泉、阿日查、代来宝、佟永 俊、金牧兰。 I DB15/T 37172024 枣组织培养育苗技术规程 1 范围 本文件规定了枣组织培养育苗的培养条件、培养基制备、外植体处理、组织培养、炼苗移栽、苗期 管理等技术。 本文件适用于枣组培苗的规范化生产。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 LY/T 1882 林木组织培养育苗技术规程 3 术语和定义 LY/T 1882界定的术语和定义适用于本文件。 4 培养条件 培养条件如下 组培室建设、组培流程、管理按照LY/T 1882 执行； 初代培养和继代培养为暗培养； 分化培养和生根培养光照强度 1500 Lx～2000 Lx，光照时间 12 h/d～14 h/d； 初代培养、继代培养、分化培养、生根培养温度为 24 ℃26 ℃, 湿度为 50～80。 5 培养基制备 5. 1 培养基母液配置与保存 5.1.1 药品与母液保存 培养基制备中使用的化学药品均为分析纯。各成分称取量按照附录 A。配制后母液 4 ℃保存，3 个 月之内使用，如出现沉淀，弃用。 5.1.2 大量元素母液配制 称量 CaCl2 2H2O 置于 500 mL 烧杯中，加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入 1000 mL 容量 瓶中，加蒸馏水定容，贴上标签，注明化合物名称，浓缩倍数，配制日期和配制者姓名。称量除 CaCl2 2H2O 以外的其余大量元素化学试剂，混合在 500 mL 烧杯中，加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入 1000 mL 容量瓶中，加蒸馏水定容，贴上标签。 1 DB15/T 37172024 5.1.3 铁盐母液配制 将 FeSO4 7H2O 和 Na2EDTA 分别溶于 450 mL 蒸馏水中，加热，不断搅拌，溶解后，两液混合，加水 定容至 1000 mL，冷却后置于棕色瓶中，贴上标签。 5.1.4 微量元素母液的配制 顺次溶解各成分后再混匀，定容在 1000 mL 容量瓶中，贴上标签。 5.1.5 有机成分母液配制 各成分分别称量后，溶解，定容在 500 mL 容量瓶中，贴上标签。 5.1.6 生长调节剂母液配制 称取 50 mg 生长调节剂。溶解后，在 100 mL 的容量瓶中定容，生长调节剂母液浓度 0.5 mg/mL。 2,4-D、吲哚丁酸（IBA）先用少量 95酒精溶解，然后加水，如溶解不完全再加热。6-苄基嘌呤（6-BA）、 噻苯隆TDZ先溶于少量的 1 moL/L 的 HCl 溶液或 NaOH 溶液。 5.2 培养基制备 5.2.1 制备培养基 配制 1 L 培养基，烧杯中先加蒸馏水 700 mL，再加入琼脂，加热搅拌。琼脂融化后，加入蔗糖， 搅拌溶解。依次量取大量元素母液、铁盐母液、微量元素母液、有机成分母液。各母液取用量按照附录 A。搅拌均匀。根据初代培养、继代培养、分化培养、生根培养的要求加入相应种类和用量的生长调节 剂。搅拌后加蒸馏水定容至 1 L。用 1 mol/L NaOH 或 1 moL/L HCl 溶液来调节 pH 值至 6.1，pH 值测定 使用 pH 计或 pH 试纸。 5.2.2 分装培养基 把制备好的培养基分装到培养瓶中，盖紧瓶盖。分装时勿将培养基沾在培养瓶瓶口。高温高压灭菌， 压力为 102.9 kPa，温度为 121 ℃, 灭菌时间为 15 min～20 min。培养基灭菌后冷却凝固后放入超净 工作台备用。贮存时间不应超过 7 d。 6 外植体采集及处理 6. 1 外植体采集 外植体为幼嫩叶片。选择无病虫害、生长健壮的枣树，4～6 月取当年生未木质化枣头枝顶端萌发 的嫩叶；12 月至次年 3 月，采集一年生休眠枣头枝，实验室内水培，取萌发的嫩叶。 6. 2 外植体消毒处理 用洗洁精水刷洗叶片表面，再用流水冲洗 30 min。用滤纸吸掉多余水分，装入无菌组培瓶内备用。 用 2次氯酸钠（NaClO）浸泡 15 min，用蒸馏水清洗至少 5 次。在超净工作台上用 75（体积分数）酒 精浸泡 30 s，无菌水冲洗 3～4 次，用灭菌滤纸吸干残留的水分，将叶片切成 0.5 cm2～1 cm2 小块用于 接种。 7 组织培养 2 DB15/T 37172024 7. 1 初代培养 初代培养采用 MS 培养基，添加蔗糖 25 g/L、琼脂 6.0 g/L，调节 pH 至 6.1。初代培养基组合为 MS 6-BA 0.5 mg/L 2,4-D 1.5 mg/L。将制备好的外植体接种于初代培养基上，每瓶接种 3～5 个，接 种后将瓶口迅速在酒精灯火焰上灼烧 2 s，盖紧瓶盖。暗培养约 14 d 形成白色愈伤组织后，转至光下 培养 7 d。 7. 2 继代培养 继代培养采用 MS 培养基，添加蔗糖 25 g/L、琼脂 6.0 g/L，调节 pH 至 6.1。继代培养基组合为 MS 6-BA 0.5 mg/L 2,4-D 1.5 mg/L。将初代培养获得的愈伤组织切成 0.3 cm3～0.5 cm3 的小块，接种 于继代培养基上，每瓶接种 3～5 个，接种后将瓶口迅速在酒精灯火焰上灼烧 2 s，盖紧瓶盖。25 d 30 d 继代 1 次。 7. 3 分化培养 分化培养采用 MS 培养基，添加蔗糖 25 g/L、琼脂 6.0 g/L，调节 pH 至 6.1。分化培养基组合为 MS6-BA 1.0