医学毕业论文食管上皮不典型增生和早期癌血清标志物的初步研究

XX大学 毕业论文 食管上皮不典型增生和早期癌血清标志物的初步研究 2014年6月25日 食管上皮不典型增生和早期癌血清标志物的初步研究 作者刘彬，崔剑峰,刘新伏，陈汶，陈凤，吕宁，潘秦镜，魏文强，乔友林 【摘要】目的寻找筛查食管鳞状上皮细胞癌前病变的方法，为食管癌的早 期诊断提供依据。方法在河南省林州市食管癌高发区，使用食管镜和Lugol氏 碘液染色检查对725人进行筛查研究。所有研究对象，取组织活检，并收集血样。 按食管镜病理组织学结果分为正常、食管炎、不典型增生、早期癌，随机抽取 84例作为研究对象，用ELISA方法检测血清中部分肿瘤分子标记物的浓度，包 括金属基质蛋白（MMP 9）；组织抑制因子（TIMP 1） ;Cu/Zn过氧化物歧 化酶（Cu/Zn SOD）;抗p53自身抗体（Anti p53auto antibody）和可溶血清白细 胞2受体（IL 2sRa）。结果正常和食管炎组MMP 9浓度中位数为150ng/ml, 四分位距为（80〜225） ng/ml；不典型增生和早期癌组中位数为97ng/ml,四分 位距为（58〜155） ng/ml；两组间浓度差异有统计学意义（P0.033）。其他4种 血清标志物在两组间差异无统计学意义。结论MMP 9检测对食管鳞状上皮不 典型增生筛查有一定意义，但需要进一步研究。 【关键词】食管肿瘤；癌前病变；横断面调查；血清标志物 Serum Markers as Predictors of Esophageal Squamous Dysplasia and Early Cancer Key words Esophageal neoplasms;Esophageal squamous dysplasia;Cross sectional survey;Serum markers 全世界食管鳞状上皮细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma, ESCC）新 发病例数在各类新发癌症中居第8位，但其死亡数在各类癌症死亡中排第6位 [l] o食管鳞状上皮不典型增生是食管鳞状上皮细胞癌的癌前病变[2],因此也是 食管癌筛查研究对象。河南省林州市是全世界ESCC和贲门腺癌患病率最高的地 区之一，男、女性ESCC的发病率都超过了 100/ （10万年）［3］,因此林州市是 研究早期ESCC防治方法的理想地区。 1资料和方法 1.1资料2002年春季，中国医学科学院肿瘤研究所在河南省林州市食管癌 基地进行现场筛查试验。研究对象来自于该地区3个村的40〜65岁非选择性志 愿者725名。使用真空抽血管空腹收集血液，离心分离血清后，干冰保存运输到 北京并储藏在-80C的冰箱中备用。 1.2组织样本采集使用Lugol氏碘染液喷洒在全部食管段，然后行食管内 镜检查［4］。在内镜检查过程中，对所有肉眼可见的病变部位（即未染色部位） 做单次或若干次直径2.8mm组织学采样。如果没有发现未着色部位或是病变， 则取食管中段部位组织。组织样品用95酒精固定，石蜡包埋，5pm切片，苏 木素伊红染色。除外一少部分为棘皮症或基底细胞增生等研究对象。从725 例研究对象中按病理组织学水平分层随机抽取84例（男44例，女40例），使用 ELISA方法检测血清中部分肿瘤分子标记物的浓度。 1.3组织学诊断两个病理医生在不知道研究对象病史情况下单独完成病理 片阅读诊断工作，其组织学诊断标准如下［5］ （1）正常鳞状上皮区域中没有 出现其它病变的组织学特征；分化良好的鳞状上皮细胞，胞浆界面清晰，散在分 布的淋巴细胞，上皮层内少见压缩的细胞核片段。如果镜下有固有层，通常包含 有散在的炎症单核细胞。（2）食管炎出现以下三条中任何一条者固有层乳头 延伸进入上皮的上三分之一，并伴有基底细胞增生，且超过上皮厚度的15；嗜 中性细胞和嗜伊红细胞出现在上皮层中；嗜伊红细胞出现在固有层中，或者炎症 单核细胞的非囊性渗透。（3）食管上皮不典型增生核不典型变化（扩大，异型 性以及浓染），正常细胞极性丧失，不正常组织出现在上皮的下三分之一（轻度 不典型增生），下三分之二（中度不典型增生），全层（重度不典型增生）不伴随 全层累及和浸润。由于组织发育不良而且有采样大小限制不能被分级的样品被归 为无特定意义鳞状上皮不典型增生NOSo 4鳞状细胞癌鳞状上皮癌细胞浸 润到基底膜。 1.4实验方法用ELISA试剂盒检测血清中标志物的浓度MMP 9试剂盒 来自 CN Biosciences 公司，TIMP 1 和 IL 2sRa 试剂盒来自 RD Systems Inc 公司，Cu/Zn过氧化物歧化酶和抗p53自身抗体试剂盒来自Oncogene公司。 实验过程采用盲法设计。两份完全相同的血清来自2000年收集的22个当地居 民混合血清作为质控，用于评价本实验的可信性。倍比稀释每个试剂盒提供的 标准样品产生标准曲线，使用BIORAD 550酶标仪的随机软件绘制标准曲线。 所有回归方程决定系数r2范围是0.95〜0.99。使用标准回归方程计算实验样品浓 度。 1.5统计分析方法使用散点图描述每种蛋白的浓度分布。由于大多数研究 对象的抗p53自身抗体浓度较低，将其描述为阴性和阳性。使用Pearson相关 和Wilcoxon秩和检验方法评价每种分子指标和人群特征的相关关系。并用 Kruskal Wallis方法检验每种分子指标浓度和病理分级的关系。将研究对象按照 病理结果分为正常和异常两组，用Wilcoxon秩和检验方法分析两组间浓度差别。 STATASE8.0软件绘制受试者工作特征曲线ROC。所有显著性水平都采用双 侧检验结果。 2结果 2.1不同病理诊断类型研究对象的人群特征年龄和性别与725例队列相似, 见表1。表184例不同病理诊断类型研究对象的人群特征 2.2MMP 9、TIMP 1、Cu/Zn SOD、抗 p53 自身抗体和 IL 2sRa 分布 情况由于大部分样品的抗p53自身抗体浓度值为0,所以将其视为定性资料阳 性或阴性，它在各级病理组织中的分布为正常53、食管炎33、轻度不典型 增生36、中度不典型增生38、重度不典型增生33和食管癌43 P0.84, 见图lo 2.3正常和食管炎及不典型增生和食管癌两组5种标志物检测结果只有 MMP 9在两组间分布差异有统计学意义。使用STATA SE 8.0软件绘制ROC曲 线用于预测不典型增生。曲线下面积为0.3695可信区间0.24〜0.49,说明 MMP 9预测不典型增生效果不佳。灵敏度、特异度最大值分别为58、34。 如果将年龄因素也包括在中，MMP 9预测效能会更低，见表2。 3讨论 寻找一种能够筛查癌前病变的方法对于食管癌的早期诊断具有重要意义。 食管拉网细胞学检查法经过40年的广泛应用，在取得较好效果的同时，也给受 检者带来很大痛苦，顺从率敏感度和特异度均 ① MMP 9 P0.09；② TIMP 1 P0.21；③ Cu/Zn SOD P0.30； ④ 抗 p53 自身抗体P0.8