周期蛋白B1在Barrett食道和食道腺癌中表达及其意义

周期蛋白Bl在Barrett食道和食道腺癌中 表达及其意义 【摘要】目的研究周期蛋白Bl cyclinBl在Barrett 食道、Barrett食道合并不典型增生和食道腺癌中的表达，评 定在Barrett食管中周期蛋白B 1作为肿瘤进展标记物的临 床价值，同时通过检测在Barrett食道粘膜肠上皮化生-不 典型增生-腺癌序列不同阶段该指标的表达探讨其与肿瘤发 生发展的关系。方法应用免疫组化法测定周期蛋白B1,实 验样本取自Barrett食管25例，其中18例合并单纯肠化，7 例合并不典型增生，食管腺癌12例，10例正常食道粘膜组织 作为对照。结果周期蛋白B1在研究组检测样本中均有高的 表达率，而对照正常食管粘膜组织均无表达，相比差异有显 著性，且在SE组、DY组、CA组的组织中周期蛋白阳性细胞 逐渐增多，差异显著。结论CyclinBl可能作为一肿瘤进展 标记物来评估患者进展为腺癌的危险性，并可能在食管腺癌 进程中起一定作用。 【关键词】Barrett食管；食管腺癌；周期蛋白Bl Barrett 食管Barr ett sesophagus, BE是一种具有重 要临床意义的食管疾病。它与食管腺癌的发生密切相关，是 一种主要的食管腺癌癌前病变，食管的原发性腺癌中约50 来自BE, BE肠化-不典型增生-腺癌的病理过程已被广为接 受［1 ］。然而大多数BE患者不进展为腺癌，有进展的患者 预后又差，现在监测策略为频繁的内镜检查和多块非靶性活 检，但是，这种方法可能漏掉不典型增生的部位，而且，给 予相对发病率较高的而低进展发生率BE这种较痛苦且较贵 的侵入性检查不易被广泛采纳，因此，人们投入很大的兴趣 应用生物标记以确定患者进展为此腺癌的危险性，目前，周 期蛋白B1作为调控细胞增殖的指标，在癌前病变研究中的应 用日渐增多。本研究对BE、BE合并不典型增生和食管腺癌 中CyclinB 1的表达和意义进行了检测和探讨。 1 对象与方法 病例和标本 本研究中所有组织切片均取自XX年3月至XX年5月于 我院行胃镜检查的病例，诊断经活检病理检查证实。其中， BE25例，食管腺癌12例，10例正常食管粘膜组织作为正常 对照。在Barrett食道中18例合并单纯肠化，7例合并不典 型增生。 主要试剂 即用型鼠抗人c yclinBl单克隆抗体和免疫组化A BC试 剂盒等皆购自福州迈新公司。 方法 cyclinBl免疫组化法石蜡切片经二甲苯脱蜡，梯度乙 醇水化3 Hz0z孵育lOmin,消除内源性过氧化物酶活性。 将切片置于10 u g/ml的saponin溶液室温孵育30 min,以 修复抗原。其他步骤按免疫组化ABC试剂盒说明书进行，DAB 显色，苏木精复染，1HC1分色，树脂封片。 结果判定 阳性细胞率光镜下每张切片组织中计数10个高倍视野 的细胞，计算阳性细胞比例。以出现棕黄色颗粒作为周期蛋 白B1表达阳性。以PBS代替一抗的切片作为空白对照。分 别对每张切片的阳性细胞百分率进行分级记分。阳性细胞必 须结构清晰、定位好，无背景着色。0分阳性细胞0；1 分1 〜10；2 分11 〜25； 3 分26〜50；4 分51 〜 7 5； 5分76〜100,根据积分确定阳性程度，1分〜2 分为低表达，3分〜5分为高表达。 统计学分析 应用SPSS统计软件，采用卡方检验，PW为差异有统计 学意义。 2结果 10例正常食管粘膜组织中均无周期蛋白B1表达。BE组, 合并不典型增生组、腺癌组周期蛋白B1的阳性表达率均显著 高于正常食管粘膜组织，三组间差异则无统计学意义，但三 组间高、低表达构成比不同，可认为从BE组、DY组到CA组 周期蛋白BE阳性细胞逐步增加，见表1。表1周期蛋白B1 在各组中的表达 3讨论 肿瘤的基本特征是细胞的失控性生长，肿瘤细胞丧失了 正常的细胞调节机制，使细胞周期启动、运行、及停止发生 异常。而表现为细胞增殖过快、过多，最终导致肿瘤的发生、 发展，因此有学者提出肿瘤本身就是一类细胞周期性疾病［ 2］o真核细胞的细胞周期包括间期Gl、S、G2和有丝分裂期 M期，这一增殖周期的调控有赖于两大主要调节成分细胞周 期蛋白cyclins和细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶cyclin dependentprotEinki nases, CDKs。cyclin Bl 作为 G2 期 的周期蛋白，活化并与C DKs即CDC2 celldivis ioncycle 形成复合物，促使细胞进行G2/M期转变。细胞周期调控机制 的破坏会导致细胞失控性生长和肿瘤的发生［3］。近年来的 研究表明，cyclinBl在许多肿瘤中异常表达如过表达、定 位改变等，呈现出癌基因的特性，CyclinBl的异常表达可 影响细胞周期的进程，促进细胞的增殖，造成细胞周期的调 控紊乱［4］,从而诱导细响的恶性转化和肿瘤形成，其与肿 瘤发生发展、预后、诊断、治疗的关系受到广泛关注。 本研究用应用免疫组化法测定周期蛋白B1的表达情况, 结果显示cyl cinBl的阳性表达率在BE、BE合并不典型增生 和食管腺癌中分别为％1 0/18、 6/7和％,与正常对照组 相比差异有显著性，因而Cycl inBl有可能作为肿瘤进展标 记物来评估患者进展为腺癌的危险性，以及为食道腺癌早期 临床诊断提供了新的依据。cylcinBl的过度表达在BE肠化 生不典型增生腺癌序列发生过程中阳性细胞数逐渐增多， 提示其可能在食管腺癌进程中起一定作用，但仍待于进一步 从细胞水平和分子水平上进行更为深入的研究。 【参考文献】 [1 ] GeboesK . Barrett sesophagu s themetaplasia dy splasia carcinomas equencemorphologi calaspects [j] . ActaGastroenterolBelg,2000, 631317. [2 ] HartwellLH,KastanM B. Cellcyclincontro landcancer [ J] . Scie nee, 1994,266 5192 18211828. [3] 赵春玲，宋咏梅，樊飞跃，等.细胞周期蛋白B 1 与肿瘤[J] .肿瘤,XX, 27 4 322326. [4] Yew mediatedproteolysi sofvertebrateGl an dS phasereg ulator s [J] . JCellPhysiol,2001, 1871110.