乳腺癌组织中BRMS1mRNA表达及意义（医学论文）

乳腺癌组织中BRMSlmRNA表达及意义 作者张英兰，魏让，刘秀英，阎建文，王丽霞，石红 梅 【摘要】［目的］探讨BRMSlmRNA在乳腺癌中的表达及 其与乳腺癌临床病理特征的关系。［方法］采用Trizol提取组织总 RNA,将mRNA转录成cDNA,用实时荧光定量聚合酶链反应 RFQ-PCR 技术检测乳腺组织BRMSlmRNA表达，以 BRMSlmRNA和GAPDHmRNA含量的比值表示BRMS1表达水 平。［结果］乳腺癌组织中BRMSlmRNA的表达水平明显低于癌 旁组织PV0.01,也明显低于正常乳腺组织PV0.01, BRMRlmRNA低表达与临床病理分期和淋巴结转移有关P 0.05, P0.01,而与患者年龄、癌肿大小、病理类型无关P 0.05o ［结论］乳腺癌组织中BRMSlmRNA的低表达与乳腺癌的 发展与转移有关，可能成为判断乳腺癌转移的一个标志物。 【关键词】乳腺肿瘤 BRMSlmRNA 实时荧光定量PCR Expression of BRMSlmRNA in Breast Carcinoma and Its Clinical Significance Abstract [ Purpose ] To investigate BRMS1 gene expression in breast cancer and its clinical significance. [s] Total RNA was extracted with Trizol. mRNA was transcribed reversely into cDNA. BRMS1 was detected with RFQ-PCR. BRMS1 gene expression were presented as the ratios of BRMSlmRNA to GAPDHmRNA. [Results] BRMS1 expression in cancer tissue was significantly lower than that in para-cancerous tissue and in normal tissue P 0.01.BRMSl low expression was related to clinico-pathologic stage and lymph node metastases P 0.05,P 0.01,respectively, but not related to age,tumor size and pathologic type P 0.05.[ Conclusion ] BRMS1 low expression is related to the progression and metastasis of breast cancer, it might be served as a marker for breast cancer metastasis. Key words breast neoplasms; BRMSlmRNA; RFQ-PCR 乳腺癌是常见的恶性肿瘤之一，容易发生转移，判断有无转移对 临床治疗、判断预后有重要意义。乳腺癌转移抑制基因breast cancer metastasis suppressor 1, BRMS1是新近发现的一个乳 腺癌肿瘤转移抑制基因，定位于人染色体Uql3.113.2[l]o将其 转染到乳腺癌细胞株MDA邺MB邺435和MDA邺MB邺231 中，可降低其转移潜能[2]。目前有关BRMS1基因的研究仍停留在 体外研究水平上。我们采用实时荧光定量PCR技术对乳腺癌组织进 行BRMSlmRNA检测，探讨乳腺癌转移的细胞特征及转移检测指 标的应用价值。 1材料与方法 1.1 一般资料 2003年3月2005年4月，我院收治的乳腺癌患者51例，年 龄31岁62岁，平均年龄43.5岁，其中浸润性导管癌23例，单 纯癌14例，腺癌4例，黏液腺癌2例，乳腺癌有淋巴结转移的35 例，未转移16例；乳腺良性疾病25例，年龄26岁55岁，平均 39.2岁，其中纤维瘤18例，小叶增生病4例，导管内乳头状瘤3 例。患者术前均未进行放疗及化疗。 1.2标本收集 对每例乳腺癌手术患者均取癌组织及癌旁组织，并取25例乳腺 良性疾病病变组织周围的正常组织作为对照，取材后立即用锡纸包裹 并标记好，放入液氮中保存备用。 1.3定量测定BRMSlmRNA表达 1.3.1主要仪器 ABI PRISM 700。荧光定量PCR分析仪（美国应用生物系统公 司），核酸测定仪Biophotometer （Eppendorf 公司）。 1.3.2主要试剂 Trizol RNA提取试剂盒，M MLVcDNA合成试剂盒，PCR 反应试剂，RNase邺free试剂，以上试剂由上海生工提供，BRMS1 及3邺磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH） RT引物，荧光定量PCR引 物，荧光探针及用来制作标准曲线的人工合成BRMS1及GAPDH cDNA均购自上海基康生物技术有限公司。 1.3.3引物序列 BRMS1 上游引物5,GACCGCCAGAGCCTGGA邺 3，， 下游引物5, CTGCCTCTGGCGTGCAGT邺 3，，荧光探针 5 邺 FAM邺 CAGCTCTGAATGGTGG邺 MGB邺 3。GAPDH 上游引物5, 邺 CCATCAATGACCCCTTCATTG邺 3，，下游 引物5，邺 CATGGGTGGAATCATATTGGAAC邺 3,荧光探 针5 邺 VICW CCTCAACTACATGGTTTAC邺 MGB邺 3。 1.3.4实验步骤 1 RNA提取Trizol法提取组织总RNA,核酸蛋白紫外分析 仪检测RNA质量和浓度。 2 RT反应用M邺MLVcDNA试剂盒进行RT反应，取总 RNA 2昭，加 0.5昭/口1 oligo邺 dT 引物 卬 1,用 RNase邺 free 水定容 12|nl,5xRT buffer 4口1, 20U/.1 RNase Inhibitor 卬1 , 10mmol/L dNTPs 2皿，20U/|nl M邺 MLV 反转录酶 卬 1,终体 积 20皿。37C 60min, 70C lOmin 反应结束，-20C保存。 3 定量PCR 20jul反应体系，内含BRMS1或GAPDH cDNA 模板2口1 阴性对照以蒸偕水代替，10 X buffer 2M1, 10mmol/L dNTPs lpl, 25 mmol/L MgC12 2皿，lOmol/L BRMS1 或 GAPDH上下游引物各2.5皿，5jiimol/L BRMS1或GAPDH荧光 探针 项，Tag DNA聚合酶含UNG 1皿，蒸偕水6皿。反应条 件50C 2min 激活 UNG, 95C 预变性 2min,