钩端螺旋体IgG检测试剂盒（酶联免疫法）

钩端螺椀体IgG 检测试剂盒（酶联免疫法） 【产品名称】 通用名称钩端螺旋体IgG检测试剂盒（酶联免疫法） 英文名称Leptospira IgG ELISA Kit 型号 无 联系call 1991-4747-194 ［产品规格】 96T 【预期用途】 试剂盒可用于定性检测人血清或血浆中双曲钩端螺旋体IgG抗体。 【前言简介】 钩端螺旋体的临床症状表现从轻微伤寒到肝肾严重受损的黄疸病。钩体存在于啮齿类动物和 大部分的家畜身上，在肾小管内寄生，然后从尿液中排出。人类感染来源于直接接触已感染 的动物（如兽医，屠宰场工人或乳制品工人）或是被动物携带者污染的空气（如农业员）， 已证明有潜在感染风险的动物接触到的水用来洗澡或是游泳也会传染。钩体通过破损的皮 肤，黏膜表面或是眼睛进入宿主细胞，潜伏期在3-30天不等，但通常在10-12天时就会发 现，在发病的第6天到第10天间就可检测到抗体，3-4周内达到高峰期，之后抗体水平会 慢慢减少，但数年后仍可检测到抗体 急性疾病的诊断可将以下因素考虑进去，如流行病学因素，临床症状，暴露于流行病地区和 其他的实验室结果，急性疾病的诊断也可包括多数情况下实验室的阳性样本的确诊，此试验 可诊断钩端螺旋体的急性感染，但阳性样本需通过其他方法进一步确诊 【检测原理】 微孔板已包被经纯化的钩端螺旋体抗原，第一次孵育，样品血清中的抗体与微孔板上的抗原 进行结合，洗去未结合的样品，加酶联物，与结合在孔内的抗体结合，第二次洗涤后，加 TMB底物液，若酶联物存在，过氧化物酶就会催化反应，溶液变蓝，加终止液，由蓝色变 为黄色，结果可直接目测或是酶标仪检测 【试剂盒组成成分】 微孔板12x8 包被了钩端螺旋体抗原 酶联物Ixllml 即用型、内含HRP标记的抗人IgG 阳性质控Ixlml 阴性质控Ixlml 底物液Ixllml 即用型、内含TMB 终止液Ixllml 内含1M的磷酸 洗涤液1x25ml 20倍浓缩 稀释液2x30ml 所需材料（未提供） 1. 移液器 2. 去离子水 3. 量筒 4. 样本稀释管 5. 吸水纸 6. 酶标仪（450nm 和 620-650nm） 【样本处理】 此试剂盒可用于血清或血浆检测，血清可在2-8C T保存5天，-20C下可保存更久，避免加 热灭活样本，避免反复冻融 单一样本的暴露评估两个样本采自同一个人的不同时间，用于说明血清转化情况。两样本 在同一时间进行检测，建议采集样本显示无反应或弱阳性的恢复期病人 【检测方法】 试剂准备 1. 实验前将所有试剂和样本平衡至室温，混匀。 2. 浓缩洗涤液可能在冰箱储存时出现沉淀，当放置室温下后沉淀就会消失，将其混匀，确保 配制稀释前浓缩洗涤液中的沉淀完全溶解，将1瓶浓缩洗涤液加入含有475ml去离子水的 试管内，混匀。 检测步骤 1. 将实验所需的板条固定于板架上（两个质控品加上样品） 2. 样品血清用稀释缓冲液以140比例进行稀释（例如10pl血清样本390）41稀释缓冲液）, 在1孔和2孔内加入100pl的阴性和阳性质控，100|_il的试验样品至剩下的孔内。 3. 室温下孵育lOmin,然后洗涤，最后一次洗涤后，吸水纸上拍干 4. 每孔加入100）11酶联物 5. 室温孵育lOmin,然后洗涤，最后一次洗涤后，吸水纸上拍干 6. 每孔加入100pl TMB底物液 7. 室温下孵育5min 8. 每孔加入100）11终止液，轻轻晃动微孔板混匀15秒 9. 加入终止液lh内读数 洗涤过程包括微孔内加满洗涤液，然后弃去反应液，洗涤三次，避免产生气泡，气泡会对最 终结果有影响 【结果读取】 目测将微孔板在白色背景下进行观察，并用、、标记出溶液的颜色强度。 酶标仪读数酶标仪校零，进行双波长读数 （450/620-650nm） 将样本结果与质控品对比 无反应样本无颜色 弱反应样本颜色为到 有反应样本颜色为 【质量控制】 通过使用质控品来确定试剂盒是否稳定。质控品的0D值必须在质控范围内。 质控品的允许范围 阴性质控0.00.3 OD 阳性质控大于等于0.5 OD