ABI7500仪器验证方案

编号 AB I 7500验证方案 方案制定 日期 方案审核 日期 方案批准 日期 上海**生物技术有限责任公司 1、简介 ABI7500实时荧光定量PCR仪，是美国应用生物系统公司推出的基于微孔 板的高通量实时定量PCR系统，其反应速度及准确性、操作实用性和使用灵活 性均有较好的提高，能满足科研工作者对于定量PCR系统高通量方面的要求， 是特异性靶基因检测与定量的一体化平台。它主要有一台ABI 7500 Block kit 96和PC计算机及显示器组成。 2、验证内容 ABI7500实时荧光定量PCR仪的验证，主要从以下几个方面进行PC计算机 运行环境的确认、ABI7500运行软件及分析软件的确认、ABI7500 PCR扩增及荧 光检测系统的确认。 3、验证目的 通过用HBV荧光PCR检测试剂盒来确认ABI7500实时荧光定量PCR仪的扩增 和检测体系精密度、线性、准确度等，验证仪器能否正常准确运行，给出可靠 的分析结果，以及96孔孔间差异是否在允许范围内。 4、验证内容 4. 1 PC计算机运行环境确认 4. 1. 1运行环境确认内容 检查配套计算机能否正常开机运行，是否有中病毒等现象，能否为 ABI7500运行软件和分析软件提供安装平台和运行平台。 4. 1. 1. 2结果记录 4. 2 ABI7500运行软件及分析软件的确认 4. 2. 1软件确认内容 双击电脑桌面上的ABI7500运行软件及分析软件的图标，看应用软件能否 打开，能否正常使用。 4. 2.2结果记录 4.3 ABI7500 PCR扩增及荧光检测系统的确认 4. 3. 1灵敏度和线性 4. 3. 1. 1 方法 利用HBV荧光PCR检测试剂盒，配制20支HBV-PCR Mix,并分别加入HBV 企业灵敏度质控品（3. 0E2, 3. 0E3, 3. 0E4, 3. 0E5, 3. 0E6, 3. 0E7）、阴性对 照、空白对照，均做复管，按照说明书的操作步骤进行。 4. 3. 1. 2合格标准 （1）空白对照和阴性对照无起跳 （2）经标化的企业灵敏度质线性相关系数RN0. 98,复管重复性良好。 4. 3. 1. 3数据记录 4. 3. 2孔间差异 4. 3. 2. 1 方法 利用HBV荧光PCR检测试剂盒，配制96支HBV-PCR Mix, 88支分别加入相 同的模板HBV standard（3. 0E4）,另有3支加入不同浓度的HBV standard 3. 0E7 （管号 91）、HBV standard 3. 0E6 （管号 90）、HBV standard 3. 0E5 （管号89）,剩余5支分别为临界对照（管号92）、阳性对照（管号93）、 阴性对照（管号94,管号96）、空白对照（管号95）,同时进行实时扩增检 测。 4. 3. 2. 2合格标准 （1）空白、阳性对照无起跳 （2）每孔相对偏差值不大于8 4. 3. 2. 3数据记录 4. 3. 2. 4数据分析 孔间差计算方法CTiX100 _ I （Ct1 Ct2 Ct3 Cln） /n 5异常情况处理 在验证的过程中，应严格按照验证方案操作，若出现个别项目不合格，应查 明原因后重新进行验证。如果属于仪器设备原因，则由验证小组和质量部负责 人协同处理或联系厂家进行维修，并填写相应记录。 6验证最终结果分析和评定 评定人评定时间 7再验证周期 7. 1在一般情况下每一年验证一次。 7.2如更更换仪器零部件或重大维修，完成后均要再次验证，以证明更换零部 件及维修对仪器的正常使用没有影响。 7.3再验证启动时，按照完整程序进行。 8验证批准 批准人 批准时间