p15mRNA在肺癌组织中的表达及其意义

p15mRNA在肺癌组织中的表达及其意义 作者戚好文，郝光辉，李焕章 【关键词】肺肿瘤 关键词pl5基因;肺肿瘤;原位杂交 摘 要目的 研究抑癌基因pl5mRNA在肺癌组织中的表达，揭示 P15基因的失活与肺癌的发生和其组织类型的相关性.方法对病理 确诊的93 非小细胞肺癌65,小细胞肺癌28例肺癌病理组织切片, 采用P15cDNA探针以原位杂交组织化学方法检测P15mRNA在肺癌组织 中的表达水平.结果pl5mRNA阳性表达于肺癌组织细胞质或细胞核 中，在细胞质中可见到较多的棕黄色颗粒，而细胞核内棕黄色颗粒相 对少见.P15mRNA的阳性表达率非小细胞肺癌为46 30/65,其中鳞 癌46 23/50,腺癌47 7/15.小细胞肺癌20 5/25.非小细 胞肺癌P15mRNA阳性表达率高于小细胞肺癌;高分化的鳞、腺癌阳性表 达率高于同组中的低分化的鳞、腺癌Plt;0. 05.结论pl5基因 的失活与肺癌的发生密切相关，而且其失活程度与肺癌组织类型的恶 性程度呈负相关. Keywords pl5gene lung neoplasms in situ hybridization Abstract AIM To show the association of inactivation of pl5gene in lung cancers with pathogenesis and variation of lung cancer tissues by studying the expression of pl5mRNA in lung cancers. S There were93cases , of which65were NSCLC and28were SCLC, confirmed by pathologi-caly. The expression of pl5mRNA in pathological sections of lung cancer was examined using pl5cDNA and in situ hy-hyidizatino-histochemistry . RESULTS In931ung cancers , positive expression of pl5mRNA was found located in the cytoplasm or nuclei, with quite a lot of brown-yellow granules seen in cytoplasm, but only a few in nuclei. In NSCLC cases the positive rate of pl5mRNA expression was46 30/65, of which, lung squamous carcinoma and lung adenocarcinoma were46 23/50 and47 7/15 respec-tively, and the positive rate in SCLC cases was20 5/25 . The positive rate of pl5mRNA expression was higher in NSCLC than in SCLC Plt;0. 05 .The positive rate in well-differentiated lung squamous carainomas and lung adeno-carainomas was higher than that in poorly differentiated ones Plt;0. 05 . CONCLUSION The results showed that pl5inactivation might be strongly related to pathogenesis of lung cancers and the degree of pl5inactivation might be negatively associated with the malignant degree of the lung cancer tis-sues. 0引言 探讨抑癌基因的失活在肺癌发病机制中的作用是目前研究中 的一个热点，抑癌基因P15/MTS2 （简称P15基因）［1］编码P15蛋 白属于INK4蛋白家族，它作用于细胞周期蛋白依赖激酶（CDK）与细 胞周期蛋白（cyclin）复合物，特异性抑制CDK4及CDK16激酶活性, 阻止其磷酸化R6蛋白，限制细胞由G1期向S期转变，减少细胞增殖. 以前我们［2］应用免疫组织化学方法证实了 pl5蛋白与肺癌的相关 性.现运用mRNA原位杂交方法检测pl5mRNA在肺癌组织中的表达水平, 以进一步认识P15基因与肺癌之间的关系. 1材料和方法 1. 1材料病理标本来源为西京医院病理科 1997-01/1998-02原发性支气管肺癌患者手术或纤维支气管镜活检组 织检查标本，共计93例，均经40g12539;L-l多聚甲醛固定及石蜡 包埋、HE染色、光镜观察证实.根据1997年世界卫生组织肺癌分类标 准进行组织学分类非小细胞肺癌（NSCLC即鳞癌加腺癌）65例，其中 肺鳞癌50 （高分化10,中分化29,低分化11）例，肺腺癌15 （高分 化3,中分化9,低分化3）例.小细胞肺癌（SCLO28例.pl5基因cDNA 探针，原位杂交组织化学试剂盒，DAB试剂盒及APES试剂均购自武汉 博士德生物工程有限公司. 1.2方法肺癌组织病理切片经二甲苯脱蜡梯度乙醇脱水.静 置于新鲜配置30mL12539;L-l的H2 02溶液中（室温24C, lOmin） 以灭活组织切片中内源性过氧化氢酶.加入1 1000比例稀释蛋白酶 K,切片置于37C15min以暴露mRNA核酸片段.含地高辛标记P15cDNA 探针的杂交液于90C〜95C水浴lOmin后置于碎冰3min.滴加10uL 冷却pl5mRNA原位杂交液干切片，37 C恒温杂交20h.滴加 5g12539;L-l BSA液,24C封闭20min,加入1 500小鼠抗地高辛 抗体，25C孵育30min后洗涤，加1 100生物素化山羊抗小鼠IgG, 25C静置20min后，洗涤，力口 SABC复合物，25C静置20min. DAB显色， 苏木精复染，常规脱水透明后以中性树胶封片. 1. 3原位杂交组织化学染色对照及阳性结果判断以博士德公 司提供的已知P15mRNA原位杂交阳性染色的膀胱肿瘤组织切片作为阳 性对照.以 0. 5mol12539;L-l , pH7. 4 的 PBS 液代替含有 pl5cDNA 探针的原位杂交液作为阴性对照. 以肿瘤细胞质中出现棕黄色颗粒状染色为阳性染色细胞.选取5 个高倍视野（X400）肿瘤组织细胞，确认视野中无阳性染色的正常组 织细胞，平均每视野阳