HPLC测定婴幼儿配方乳粉中三种脂溶性维生素

HPLC测定婴幼儿配方乳粉中三种脂溶性维 生素 摘要建立了同时测定婴幼儿配方奶粉中维生素 A、维生素E 包括和B-胡萝卜素等脂溶性维生素的高效 液相色谱测定法。采用 Zorbax NH5 um, 4. 6 mmX 250 mm i. d 色谱柱，以体积为750毫升正烷、250毫升甲基叔丁基醒和 3毫升甲醇混合，还有纯正己烷作为流动相，进样量100 uL, 柱温箱25Co方法检出限0.0001〜0.02 mg/kg,加标回收 率95〜101,相对标准偏差为0.4〜0.6。该法具有样品 前处理简单，灵敏度高，分析时间短等优点，适用于婴幼儿 配方奶粉中 Vitamin A Palmitate、Vitamin E Acetate Vitamin E Synthetic 和 3 -carotene 的同时测定。 关键词高效液相色谱仪婴幼儿配方奶粉脂溶性维生 素 中图分类号TS252. 7文献标识码A文章编号 1672-5336 2013 20-0028-02 1引言 油溶性维生素主要包括维生素A、维生素E、维生素D、 维生素K等等，虽然这些维生素在体内虽然含量很少，但是 但在人体生长、代谢过程中却发挥着非常重要的作用，因而 是婴儿配方奶粉的重要组成部分。 目前国标中测试这些油溶性维生素的方法主要是液相 色谱法1,但是在这些方法中都要用到皂化、萃取，操作 复杂，耗费时间长，容易产生误差。而本文所采用的用酶解 前处理样品然后用HPLC测定的方法简单快速，准确性也较 高。 2实验 2. 1仪器和试剂 2. 1. 1仪器 Waters2695高效液相色谱仪，配置自动进样器，紫外检 测器，荧光检测器。 2. 1.2试剂和标准品 甲醇，正己烷，甲基叔丁基醒，异辛烷，丁基羟基茴香 醒，木瓜蛋白酶，对位苯二酚，无水醋酸钠，盐酸，Vitamin A Palmitate 标准品、Vitamin E Acetate 标准品、Vitamin E Synthetic标准品和B-carotene标准品。市售婴幼儿配 方奶粉。 2木瓜蛋白酶溶液用约80毫升水将100毫克对位苯 二酚以及4克醋酸钠溶解在100毫升的烧瓶中。随后，用稀 盐酸将pH调节至5.0。添加2克木瓜蛋白酶，定容。 酸化甲醇在1升甲醇中添加20毫升乙酸和20毫克丁 基羟基茴香酵BHA并混合。 2.2色谱条件 色谱柱正相Zorbax NH色谱柱；梯度洗脱条件见表1。 柱温为25Co 检测波长见表2o 流动相A正己烷流动相B 750毫升正烷、250毫升 甲基叔丁基醒和3毫升甲醇混合。 如果在分析中只需要B-carotene,则可以通过单独注 入 50uL,运行 HPLC等度模式a95； B5波长455nm, 运行时间仅为5分钟。 2.3样品处理 准确称取0. 5g样品到一根50ml塑料离心管中，加入6ml 水，再加入5ml2木瓜蛋白酶溶液，震荡涡旋混匀，然后将 试管置于37 2 C的恒温水槽中，放置20-25分钟。将试 样从恒温水槽中移出并冷却冷冻约5分钟或冷藏约20分 钟。加入20毫升酸化甲醇，并混合。用移液管，精确加入 10. 0ml异辛烷。旋紧盖子，以防止发生泄漏，并在震荡机上 振10分钟。然后按3000rpm,进行离心5分钟，得到上层异 辛烷层。将离心管内的异辛烷注入进样小瓶内，就可以进行 液相分析。 2.4定性定量方法 采用标准物质的保留时间对样品峰进行准确定性，采用 外标法以峰面积计算定量，依次配制不同浓度的标准溶液进 样分析，以质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标绘制标准 曲线。 3结果 表3是用紫外测定VA和B-carotene和用荧光检测器 测定VE的到一些数据。 4结论 同时测定婴幼儿配方奶粉中3种酯溶性维生素的高效液 相色谱测定方法。该法样品预处理简单，分离度高，明显提 高了检测效率，且其准确性和重复性好，具有推广应用的实 际意义。 参考文献 [1]GB 5413. 9-2010婴幼儿食品和乳品中维生素A、D、 E 的测定[S1.2010.