HSF2基因在肺癌中的表达意义

HSF2基因在肺癌中的表达意义 【摘 要】目的检测肺癌组织中HSF2基因的表达和意义。方法 分别采用Western blot和RT-qPCR技术，检测50例肺癌组织及其对应癌 旁组织中HSF2基因蛋白质和mRNA变化。结果50例肺癌患者组织及其正 常癌旁组织对比，38例的蛋白质水平明显升高P〈0.05,而正常肺组织 中HSF2基因的mRNA缺失率达80,正常组织中HSF2基因表达明显低于肺 癌组织P〈0.05。不同年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、组织类型中 HSF2基因表达无显著差异。结论肺癌中HSF2基因表达水平的升高，暗 示HSF2基因在肺癌的发生发展中起一定作用。 【关键词】HSF2；肺癌；蛋白质；mRNA 【中图分类号】R734.2【文献标志码】A【文章编号】1007-8517 2016 12-0177-02 Abstract Objective In order to investigate the significance and expressioon of heat shock factor 2HSF2 gene in lung cancer. s We collected 501ung cancer tissue and adjacent cancer normal tissue samples. Meanwhile, the expression of HSF2 was investigated by Western blotting and RT-qPCR. ResultsWhen compared the lung cancer tissue and adjacent cancer normal tissue samples, we found that 76 38 of 50 of the HSF2 protein in cancer tissues were upregulated compared to the normal lung tissues P0. 05 . However , in normal tissue , the rare of mRNA down-regulation was 80. In normal control, expression of HSF2 gene was lower than lung cancer tissue. In addition, there was no significant difference in age status, gender status, tumor size status, histological differentiation status and histologic type of lung cancer. Conclusion The result of HSF2 gene upregulation, which indicate HSF2 may participate ination and development of lung cancer. Keywords HSF2； Lung Cancer； Protein； mRNA 热休克蛋白heat shock protein, HSP作为一种分子伴侣，主要 功能在于稳定细胞结构，使细胞维持正常的生理功能。真核生物中已发现 的HSFs有四种亚型HSF1、HSF2、HSF3和HSF4[1],具有的共同结构为 一个保守的DNA结合区域DNA binding domain, DBD和一个三聚区域 Trimerization domain, TD,以及存在于N-端和C-端的非保守的转录 激活功能域及调控区域。目前认为HSF2对热刺激耐受，对生长、发育和 分化的信号更敏感，可以调控胚胎发育[2]。研究发现，在睾丸中，HSF2 表达上升且在精子形成中具有重要的作用通过敲除HSF2的小鼠在神经系 统发育和生殖上出现异常，暗示HSF2在发育中起重要作用[1； 3-11] o 国内亦有相关报道，HSF2 mRNA水平在生精细胞凋亡早期略有降低，而在 凋亡高峰期之后其表达急剧下降。HSF2蛋白可能调控Hsp70基因的表达， 而且可能通过多种方式影响精子的形成并抑制生精细胞的凋亡。目前HSF2 的作用机制国内外均无统一定论。有研究认为HSP2作为细胞内的保护蛋 白，对肺组织上皮细胞的修复具有重要的作用［12］。因此本研究用Western blot和RT-qPCR技术检测肺癌组织和癌旁组织HSF2基因的蛋白质和mRNA 的变化，分析HSF2表达水平和肺癌发生发展的关系。 1资料与方法 1. 1 一般资料 选取2015年1月至2015年12月本院收治的肺癌患者 50例（取距离肿块5 cm以上作为正常对照组织，50例），男30例，女 20例；年龄36〜70岁，平均年龄（560.4）岁；其中高分化23例，中 分化15例，低分化12例；小细胞肺癌18例，非小细胞肺癌32例。所有 患者术前均未经过任何治疗。取材时将所取组织用预冷的DEPC处理后的 双蒸水冲洗组织两遍后，置于液氮中冷冻保存备用。 1.2 HSF2基因蛋白质的检测将肺癌组织及正常癌旁组织加入组织裂 解液后，于浆器冰上研磨及超声破碎，离心后收集上清，吸取上清用烤蓝 法定量。然后，以各泳道50ug总蛋白，用12SDS不连续聚丙烯酰胺凝 胶进行电泳分离，转膜，经封闭，标一抗和二抗，洗膜和显影后，即可进 行结果分析。 1. 3 HSF2基因mRNA的检测 组织总RNA按照RNAprep Pure动物组织 总RNA提取试剂盒DP431 （TIANGEN,北京）说明书进行。引物上海生物公 司合成，序列为 HSF2扩增片段为139bp Forward 5’ - AAGTTCAGGCAGTGATGGCA -3’Reverse 5’ - TGCACAGAACTAGTGAAAAGATCA -3， GAPDH扩增片段为185bp Forward 5’ -GAAGGTCGGAGTCAACGGAT-3z Reverse 5’ -GAGGGATCTCGCTCCTGGAAG-3 1.4统计学方法采用SPSS 20.0统计软件进行数据处理和分析， HSF2基因的表达用x 2检验和方差分析，以P0. 05为差异有统计学意义。 2结果 2. 1 Western blot检测HSF2蛋白的表达 为了了解HSF2蛋白在肺癌 组织及癌旁组织中表达情况，将肺癌组织及癌旁组织的蛋白提取后用 western blot检测HSF2的表达。结果显示，38例肺癌组织中HSF2蛋白 呈现高表达，而在所有正常癌旁组织中呈现低表达（图1A）。两组比较差 异具有统计学意义（x 261. 29, P〈0. 05）。 2. 2 RT-qPCR检测HSF2 mRNA为观察HSF2基因在肺癌组织及正常癌 旁组织的表达情况，采用RT-PCR技术检测HSF2基因mRNA的表达情况。 结果显示，在50例肺癌组织中，