Skp2在膀胱上皮癌中的表达及意义

Skp2在膀胱上皮癌中的表达及意义 作者李朝争赵金媛张祥宏王华玖白杰关伟贾文平 【摘要】目的探讨细胞周期蛋白Skp2表达与膀胱移形细胞癌 生物学行为的关系。方法对73例膀胱移形细胞癌进行组织学分级 及分期，另取22例正常膀胱组织作为对照，采用免疫组织化学方法 S P法检测各例组织中Skp2蛋白表达水平，并分析其表达水平与 临床病理特征的关系。结果Skp2蛋白阳性表达率为50. 737/73, Skp2蛋白表达与肿瘤组织学分级、病理分期显著相关。结论Skp2 是评估膀胱移形细胞癌恶性程度，估计预后有价值的指标。 【关键词】膀胱移行细胞癌；Skp2;免疫组织化学；表达 [ABSTRACT] Objective To investigate the significance of the protein expression of Skp2 in the progression and prognosis of bladder transitional cell carcinoma. s The pathological stage and histological grade were assessed in the 73 cases with surgically resected bladder transitional cell carcinoma. The normal bladder tissue of twenty two cases was used as control. The expression of Skp2 was tested by immunohistochemical , and the related clinical phase and its expression were analyzed. Results The expression rate of Skp2 was 50.7, Skp2 expression was related with histological grade and pathological stage of tumors closely. Conclusion Skp2 are important prognostic factors for patients with bladder transitional cell carcinoma. [KEY WORDS] Bladder transitional cell carcinoma; Skp2; Immunohistochemistry; Expression 膀胱移行细胞癌BTCC 是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，具有生长 缓慢、多发性、复发性等临床特点。它的发生发展受多种基因的调控, 在细胞周期中，G1-S期转换的调控是一关键点，Skp2和P27是近 年来新发现细胞周期调控基因，主要参与G1-S期调控，是细胞从 G1-S期转换的主要限速因子之一。Skp2是F box蛋白家族中重要 的一员，通过泛素化降解P27蛋白，参与细胞周期调控，与肿瘤发生 发展和预后密切相关[1]本实验采用免疫组化技术对P27和Skp2在 膀胱移行细胞癌及其癌旁或正常膀胱粘膜组织中的表达水平及相互 关系，探讨Skp2与临床病理指标的相关性，评价对患者预后的价值。 1材料与方法 收集我院1998 - 2004年间手术切除后经病理确诊为膀胱移行细 胞癌具有完整临床病理资料及组织标本共73例（TUR-Bt 51例、膀 胱部分膀胱部分切除15例、根治性膀胱切除7例）病例。另外，选 用22例非肿瘤粘膜供对照研究（其中12例为距肿瘤2cm以上的癌 旁正常粘膜，另10例为正常膀胱粘膜）。全部标本均进行P27和Skp2 蛋白检测。 1. 2试剂与方法 Skp2鼠抗人单克隆抗体（克隆号1G12E9 ） , P27鼠抗人单克隆抗 体（克隆号DCS-72.F6）均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。 标本采用链霉卵白素一过氧化物（S P）法，具体操作按说明书进 行，切片常规脱蜡至水，微波修复抗原，3过氧化氢处理lOmin,抑 制内源性过氧化物酶活性。正常羊血清处理15min减少非特异性背 景。Skp2和P27单克隆抗体（抗体稀释比1 50）, 抗4C孵育过 夜，二抗处理15min链霉菌抗生素蛋白一一过氧化物酶复合物处理 15min, DAB显色来自水冲洗终止反应，苏木精复染、脱水、透明、 封化。用磷酸盐缓释液替代一抗作为阴性对照，用已知乳腺癌作为阴 性对照。 Skp2、P27以细胞核出现棕黄色颗粒为阳性细胞[2],在400倍光 镜下观察10个视野，计数1000个肿瘤细胞计算阳性细胞百分率。 1. 4统计分析 采用SAS统计分析软件，进行单因素方差分析临床病理资料与免 疫组化结果以及Skp2和P27之间相关性，检验水准oc为0. 05, Plt; 0. 05为统计学差异有显著性。 2结果 2. 1 Skp2在正常膀胱粘膜与膀胱移行细胞癌组织中的表达情况 在正常22例粘膜中Skp2阳性表达率13. 6 3/33 。在73例膀 胱移行细胞癌组织中，Skp2蛋白阳性表达率50.737/73,显著高 于正常粘膜Plt;0. 05。 2. 2 Skp2蛋白表达与膀胱移行细胞癌临床病理的特殊关系 Skp2蛋白表达与膀胱移行细胞癌肿瘤组织分级显著相关x 2 11. 55, Plt; 0. 05,与临床分期显著相关x2 10.5,Plt;0.05, 有淋巴转移组Skp2蛋白水平显著高于无淋巴转移组Plt; 0. 05 o 3讨论 P27是调节细胞周期的周期素激酶抑制因子，P27mRNA在正常细胞 周期中是恒定的，蛋白水平在GO, G1期最高，在S、M期较低。P27 对细胞周期G1-S节点有重要的调控作用，抑制细胞的增殖。当肿瘤 细胞受到癌性生长信号刺激时，P27水平降低促进G1期的进展，增 加细胞增殖的速度，促进肿瘤的发生发展。低表达的P27已在多种肿 瘤中观察到，如淋巴瘤、乳腺癌、结肠癌、食管癌、前列腺癌、肝 癌等。在非小细胞肺癌、口腔磷状细胞癌、大肠癌和前列腺癌以及乳 腺癌的研究中证实，P27水平越低预示着肿瘤预后越差［3〜7］。 Skp2基因染色体5pll3,是F box蛋白家族中成员之一，在泛 素蛋白酶体途径中能特异性识别底物，并与之结合使之进入泛素化降 解。Skp2通过对多种靶蛋白的泛素化降解与细胞周期调控及肿瘤发 生发展和预后密切相关。目前研究发现P27蛋白水解主要是通过泛素 化-蛋白水解体途径完成［8］ , P27的水平取决于Skp2依赖的蛋白水 解，细胞由静止状态进入增殖状态需要P27的降解。Skp2是正常或 异常细胞进入S期必须的，Skp2首先在G1-S期之间出现，在S一 G2期升高，在M期快速下降。吕增会等［9］用免疫组化方法，在对69 例胃癌组织28例正常胃粘膜组织检测Skp2的表达水平时发现正常粘 膜组织中Skp2表达水平极低，而在胃癌组织中表达水平明显增加