g四链体hemindna酶的催化反应的研究及应用

南开大学 硕士学位论文 G-四链体-hemin DNA酶的催化反应的研究及应用 姓名徐静 申请学位级别硕士 专业化学；分析化学 指导教师孔德明 201105 GG牧刺迨菠G的二级结构，可以与氯化血红素GGGG结合形成具有 GG赣A糜赢G和GG传感器的设计结合寡核昔酸 G姑械囊欢诵纬梢惶酸暮塑账峡矗煌GGGWGG托叵汆奏GG可以形成 分模式的GG牧刺G。相应地再设计另一条短链与长的核昔酸链的部分互补。有 四链体的形成，同时促使具有催化活性的GG牧刺GGGG GG言内.四链体GGGGG覆渭拥拇吠G从口挠跋欤壕」瞭.四链体 GGG 了其更远的发展和应用，如相对比较低的催化活性和反应产物GG 一的歧化 的性能G缁G赡.四链体.GGGGG傅腊G膏殳G,扩大GG牧刺澹由GG 酶的应用范围，使GG成为裸眼检测的理想底物。此外实验证明了磷酸基团、 AAAAAAAAAAAAAA AAA AA AA a AAA璟AAAA才酋AAAAAAAA AAAA. A AA AAA AAAAAAAAAA AAAAAA AAAA AAAAAA AA AAAAAA AAA AAA AAAAAAA AAAAAAAAA AA a Aa AAA委瓦AAA培AAA, AAAAAA AAA AAA AAAAA AA AAA, M AAAAA A AAA AAAAAA AAAAAAAAAAA, A AAAAAAAAAA培A AA. AAAAAA AAAAAA AAAA 培 A AAIAA AAAAAAAAAAA. AAAAAAAAAA AAA AAAAA a AAAA AA AAA AAA AAAAAAAAA AAAA. AA, A AAAAA 鄙 iAAAAA AAAAAAAAA A AAAA AAAAAAAAA AAA, AAAAAA AAI 既 AAAAAAAA AAAA. 通过鸟噂吟的1谎踉1佑月乍衾胱臃N1湮蛔害茫1佣1銮角莒.四链体结构的稳 定性11。 111111 图11 唬0 堪〜 向和环的类型二个因素，根据形成11牧刺宓暮怂峡词1康牟煌1琨.四链体可 分子11牧刺1图11111. 111槌栗.四链体结构的连续1姑蟹直鹳1条、 1麋1条独立的核酸链所提供的［11JH；四分子11牧刺搴退i肿靓.四链体属 于分子间11牧刺澹1 肿者JL四链体则属于分子内11牧刺滩F渲蟹肿蛹致. 四链体的形成速度相对较慢并且其稳定性随核昔酸链浓度的增加而增加；而分 子内11牧刺宓奈榷4栽毒凰媪吹呐E确N1淆111。 网 111i I 二 1。。。..。， 甲行 甲行甲行 三季 图11 1111] O 平面上，同时末端环又可分为侧环1111 111投越腔11111 研究者必须要有足够的时间使反应达到平衡，这样才能获得较准确的结果。 II. I芯税.四链体结构的方法 由于11牧刺褰昴沟亩喋I裕I沂.四链体的结构对其应用有着十分重要 单晶衍射111 胺基上的质了峰，化学位移在1. 1111 泽增强谱111馄咨先舫觥盅前坊1由糅11. 1111 的作用比非键合的质了要慢得多，多位核磁技术被用来阐述更精确的结构【11。 11氏衷10011111处呈现减色效应。通过升温和降温绘制 11111111 [1] O 由 11和11克褐校111 11n秸叩慕饬次露仁遣煌1模璃溶液中的％为1士 1妫1哂W 化相对较小。 11、/口苣淑捎诰哂懈明直媛识1晌I恢盅芯貌四链体结构的强大方法。 11 vpOa唤隹梢约骰饨昴怪刈掠11 一箍梢悦魅楔.四链体核心骨架和多变 的环结构。这种方法的缺陷是只对固态结构进行研究，然而固态下的结构并不 一定与溶液中的结构相同。此外获得可靠的单晶也不是一件易事【1】。 Innin 11牧刺澹由11 是具有催化活性的11肿印1 11牧刺澹由11 型分了，中心的铁离了与仆琳环的1匏由臃01湮蛔饕茫1趣111好.四 催化能力更强的原因所在。然而反平行11牧刺逵捎详凡空诒瘟肆礁觞.四分体 1 图11不用构型11牧刺逵岛111岷鲜疽馔迹11分子内平行11牧刺澹由11配合物, 11牧刺澹由11 近年来有关11牧刺澹由11 一蛋11赐 i 11,砖辛车1;志彳 11赣糜W1均相检测的原理示意刚删 的酶活性。利用此方法进行1的定量检测，其检测限可达到111。此外该方 发生强烈的相互作用而将1蟠精. 11微碱基对上取代下来，从而又降低了上述 二倍体结构的稳定性，使得体系的催化活性降低。利用此方法即可进行半胱氨 酸的定量检测，其检测限可以达到1 1。 111传感器 点，1111芯啃n椿杓屏艘恢只1赡.四链体111 两者可以相互结合形成一种新的更为稳定的分了内发夹结构。因此原有的发夹 当11作为催化反应的底物时，在11牧刺澹由11 入就不会对11邛堂一四链体的结合作用产生显著的影响，反应体系的颜色基 筛选结果可以用裸眼判定，消除了对仪器的依赖性；试剂用量少，价廉，使用 11核酸适配体简介 并将其用于研究小分了核酸与靶物质相结合【1洌11嵌言午11技术的研究开 物质/核酸的复合物分离复合物并洗脱与靶物质结合的核酸，即从中筛选出与 i1【，1 111 图11 诱导的适应性识别111 O 晒 C 、 项 / 寻 撕一 1 11111 .11111 图11核酸适配体和靶物质结合的儿种方式 111鳖信公11醴。卸孜镑加11” I I以鲁米诺作为氧化 适配体底物后，由于适配体序列与底物相互作用则导致茎.环结构被破坏，释放 111朝11〜11隅ll；卅里ihlli I簟I缎 璟 I翊min, iiiio infill. hi用i 11 II赣糜谑逝涮宓孜铜募毂狭11和11黄I和溶解酵素 属离子等目标物222222. 22222222A222］。 222, 222被2222222讲邕蜻22.磺酸2通常作为反应底物由22氧 果表明22唤隹梢栽邑靓.四链体222 22斗的歧化作用。因此22梢宰四链体.222 2. 2 / 22型基因扩增热循环仪2贾苍A湛萍加邢薰22； 2. 22型双光束紫外可见分光光度计2本台瘴壁虫靡瞧饕邢拊鹑喂22； 和22都从2222222购买，且都为分析纯