Smad7和TGFβ1在胃癌患者中的表达及意义

Smad7和TGF 01在胃癌患者中的表达及意义 【摘要】目的 探讨Smad7和TGF 01在不同临床病理 特征中胃癌的表达意义，以期为胃癌的发生发展提供实验基础。方法 以104例胃癌标本作为研究对象，50例正常胃黏膜组织作为对照， 采用流式细胞术，分别检测Smad7和TGF Pl的表达及其在不同临 床病理特征之间的关系。结果 胃癌中Smad7和TGF 0 1的表达明 显低于对照组，Smad7和TGF 0 1的表达与胃癌分化程度、浸润深 度及淋巴结转移密切相关，二者在胃癌中的表达呈正相关。结论 Smad7和TGF 0 1在胃癌发生发展中具有重要协同作用，联合检测 Smad7和TGF 01的表达可能与判断预后有关。 【关键词】胃癌；Smad7; TGF流式细胞术；预后 侵袭和转移是胃癌的重要特征，是导致患者致死性的重要原因。细 胞信号转导的异常是多种疾病发生的分子基础，与肿瘤的发生发展有 重要关系。肿瘤生长因子TGF作为一种多功能的细胞因子， 其介导的信号通路与多种肿瘤的发生发展密切相关。本实验将应用流 式细胞术半定量检测104例胃癌中Smad7和TGF 01的表达情况， 探讨二者在胃癌发生发展中的作用及关系。 1材料与方法 1.1标本采集收集胃癌根治手术切除后冻存的新鲜标本104 例，年龄为34〜75岁，平均53.2岁，其中男性64例，女性40例。 患者术前均未进行任何治疗。同时选取病理证实切端无癌的正常胃黏 膜新鲜组织50例作为对照。 1. 2流式细胞术检测两种蛋白的表达 将冻存的新鲜标本取 出，用70酒精固定3d后，将标本放在120目不锈钢网上，用眼科 剪子将组织剪碎，用镶子轻搓组织，同时用生理盐水进行冲洗，直到 组织搓完。收集混悬液，用铜网过滤去除块样组织，收集细胞悬液， 离心3 min,制成1 x 106/ml单细胞悬液，取1ml,加入一抗，室温 孵育30 min,加入PBS 10 ml洗涤，弃上清，加入FITC IgG二抗 100 口1,避光室温孵育30 min,加入PBS 10 ml离心，弃上清后， 加入PBS 0.1 ml,经铜网过滤后用流式细胞仪进行检测〔1〕，并对 数据进行分析。 1.3结果判定方法 流式细胞术结果用荧光指数（FI）表示 Smad7和TGF 0 1表达的相对含量，即FI（胃癌中蛋白表达的平 均荧光强度对照样品平均荧光强度）/（正常对照样品平均荧光强 度对照样品平均荧光强度）。 1. 4统计学方法采用SAS6. 12软件进行t检验，并进行相关 性分析。 2结果 2. 1 Smad7和TGF 0 1在胃癌、正常胃黏膜组织的表达Smad7 和TGF P 1在胃癌中的表达量明显低于正常胃黏膜组织 Plt; 0.001。见表1。表1 Smad7和TGF 0 1在胃癌、正常胃黏 膜组织中的表达与正常胃黏膜组织比较lPlt; 0. 001 2. 2 Smad7和TGF 01的表达与胃癌临床病理特征 的关系由表2可见，Smad7和TGF 01与胃癌的分化程度、浸润深 度及淋巴结转移密切相关Plt;0. 05。表2胃癌中Smad7和TGF 01的表达与临床病理特征的关 2. 3 Smad7和TGF 01表达的关系Smad7和TGF 1在胃 癌组织中的表达呈正相关r0. 43, P0. 0125,而Smad7和TGF 0 1在正常胃黏膜组织中的表达无明显相关性Pgt; 0. 05 o 3讨论 Smad蛋白是目前发现的TGF 0家族受体激酶的关键作用底 物，广泛分布在果蝇及各种哺乳动物细胞中，其可分为三类①受体 激酶激活的Smad蛋白，作为TGF 0家族受体激酶的直接底物。② 辅助型或共同介导的Smad,主要通过同第一类相连，参与到信号转 导中。③抑制性或拮抗性Smad,通过阻断受体激活第一类Smad,抑 制其他两类底物的信号转导〔2〕。Smad7是属于抑制性Smad,可以有 效地与活化的TGF0RI相互作用，影响受体调节性Smad与TGF 0 R的 结合，从而影响负性调节信号向核内的传递。Wang等认为Smad7在 胰腺癌中低表达与肿瘤的进展有关〔3〕。TGF 0家族由结构、功能 相关的多肽生长因子组成〔4〕，具有多种功能活性，如调节细胞生长、 分化、凋亡、增殖、黏附、炎症等。TGF 01是经双硫键联结的具 有多种生理功能的多肽，是TGF P的一种异构体，在多种疾病发生 发展中具有重要的作用。TGF 0信号转导的受体和胞内信号转导分 子Smad7等组成了 一个肿瘤作用的通路，在此过程中Smad7起着瓶颈 作用。 本次实验通过流式细胞术半定量检测胃癌中Smad7和TGF 0 1的表达，结果显示胃癌中Smad7和TGF 01的表达明显低于正常 胃黏膜组织，提示Smad7和TGF 0 1参与了胃癌的发生过程。同时 Smad7和TGF 0 1在表达量与胃癌的分化程度、浸润深度及淋巴结 转移有关，提示Smad7和TGF 0 1参与了胃癌的分化、浸润及转移。 由于分化、浸润及转移与患者预后相关，因此，联合检测Smad7和 TGF 0 1的表达可能对判断患者的预后有重要价值，即Smad7和TGF 01低表达者预后差。由于Smad7和TGF 01在胃癌中的表达具 有明显正相关，提示二者在胃癌中具有正向的协同作用o Smad7在TGF P1诱导表达后，反过来直接与TGFPR结合形成稳定的复合物， 并且具有与其他信息分子不同的负性调节作用，是一种潜在的原癌基 因〔5〕。有观点认为Smads蛋白作为TGF 0的受体下游信号传导因 子，建立起胞膜与胞核之间的信号传导通路〔6〕。Smad7表达水平决 定TGF 01的细胞效应，转染反义表达Smad7的载体可以增强细胞 对TGF 01的应答〔7〕。 总之，胃癌中Smad7和TGF 0 1低表达，Smad7和TGF 01 在胃癌的发生发展中具有协同作用，联合检测二者的表达可能对判断 预后有重要价值。 【参考文献】 1刘爱东，庞久玲,刘士生.胃癌中基质金属蛋白酶9和CD105 表达关系的研究〔J〕.中国老年学杂志，2009; 29 7 8867. 2张国，王天才，唐望先，等.Smad3. Smad7基因表达与肝 纤维化发病关系研究〔J〕.中华消化杂志,2002; 22 11 64750. 3 Wang P, Fan J, Chen Z, et al. Low level expression of Smad7 correlates with lymph node metastasis and poor prognosis in patients wi th pancreatic cancer〔J〕, Ann Surg Oncol , 2009; 164 82635. 4王学寅，张玉侠，赵霞.羟苯磺酸钙对慢性肾功能不全大鼠 TGF 0 1、BMP7表达的影响〔J〕.中国医科大学学报,2009; 383 20810. 5文定军，彭世波，张士龙，等.Smad7蛋白分子及IFN y 在人膀胱移行上皮细胞癌中表达的临床意义〔J