HPLC常见问题处理及日常维护

压力 A、没有压力显示，没有流动相流动 原因 解决方法 1、电源问题 1、接通电源，开机 2、保险丝被烧坏 2、更换保险丝 3、控制器设定不正确或设定失败 3、a、采取恰当的设定 b、修理或更换控制器 4、柱塞杆折断 4、更换柱塞杆 5、泵头内有空气 5、溶剂脱气、启动泵抽出空气 6、流动相不足 6、a、补充流动相 b、更换入口滤头 7、单向阀损坏 7、更换单向阀 8、漏液 8、拧紧或更换手紧接头 B、流动相流动正常，但没有压力显示 原因 解决方法 1、仪表损坏 1、更换仪表 2、压力传感器损坏 2、更换压力传感器 C、压力持续偏高 原因 解决方法 1、流速设定过高 1、调整流速设定 2、柱前筛板堵塞 2、a、在允许情况下反冲色谱柱 b、更换筛板 C、更换色谱柱 3、流动相使用不当或缓冲盐的结晶沉淀 3、a、使用恰当的流动相 b、冲洗色谱柱 4、色谱柱选择不当 4、选择恰当的色谱柱 5、进样阀损坏 5、清洗或更换进样阀 6、柱温过低 6、提iWj温度 7、控制器失常 7、修理或更换控制器 8、保护柱阻塞 8、清洗或更换保护柱 9、在线过滤器阻塞 9、清洗或更换在线过滤器 D、压力持续偏低 原因 解决方法 1、流速设定过低 1、调整流速 2、系统漏液 2、确定漏液位置并维修 3、色谱柱选择不当 3、选择恰当的色谱柱 4、柱温过高 4、降低温度 5、控制器失常 5、维修或更换控制器 E、压力不断上升 原因 解决方法 1、见列表C 1、见列表C F、 压力降为零 原因 解决方法 1、见列表A、B 1、见列表A、B G、压力不断下降，但不回零 原因 解决方法 1、见列表D 1、见列表D H、压力波动 原因 解决方法 1、泵中有气体 1、a、溶剂脱气 b、从泵中除去气体 2、单向阀损坏 2、更换单向阀 3、泵密封损坏 3、更换泵密封 4、脱气不充分 4、a、溶剂脱气 b、改脱气方法（使用在线脱气法等） 5、系统漏液 5、确定漏液位置并维修 6、使用梯度洗脱 目于流动相粘度的变化引起的压力波动 漏液 A、 接头处漏液 原因 解决方法 1、接头松动 1、拧紧 2、接头磨损 2、更换 3、接头过紧 3、a、拧松，再重新拧紧 b、更换 4、接头被污染 4、a、拆下清洗 b、更换 5、部件不匹配 5、使用同一品牌的配件 B、 泵漏液 原因 解决方法 1、单向阀松动 1、a、拧紧单向阀（不必拧的过紧） b、更换单向阀 2、接头松动 2、拧紧接头（不必拧的过紧） 3、混合器密封损坏 3、a、更换混合器密封 b、更换混合器 4、泵密封损坏 4、维修或更换泵密封件 5、压力传感器损坏 5、维修或更换压力传感器 6、脉冲阻尼器损坏 6、更换脉冲阻尼器 7、比例阀损坏 7、a、检查隔膜，如果漏液立即更换 b、检查手紧接头，损坏的立即更换 8、放空阀的损坏 8、a、拧紧放空阀 b、更换放空阀 C、 进样阀漏液 原因 解决方法 1、转子密封损坏 1、重新安装或更换进样阀 2、定量环阻塞 2、更换定量环 3、进样口密封松动 3、调整 4、进样针头尺寸不合适 4、使用恰当的进样针 5、废液管中产生虹吸 5、保持废液管高于废液液面 6、废液管阻塞 6、更换或疏通废液管 D、 色谱柱漏液 原因 解决方法 1、尾端接头松动 1、拧紧接头 2、卡套内有填料 2、拆下、清洗卡套、重新安装 3、筛板厚度不合适 3、使用合适的筛板（参考下表） 筛板选择指导 物质粒径 筛板孔径 3-4u 0.5u 5-20u 2u E、 检测器漏液 原因 解决方法 1、流通池垫片损坏 1、a、避免过大的背景压力（压力降） b、更换垫片 2、流通池窗破碎 2、更换窗口 3、手紧接头漏液 3、拧紧或更换 4、废液管阻塞 4、更换废液管 5、流通池阻塞 5、重新安装或更换 色谱峰 原因 解决方法 1、筛板阻塞 1、a、反冲色谱柱 b、更换进口筛板 C、更换色谱柱 2、色谱柱塌陷 2、填充色谱柱 3、干扰峰 3、a、使用更长的色谱柱 b、改变流动相或更换色谱柱 4、流动相PH选择错误 4、调整PH值。对于碱性化合物，低PH值 更有利于得到对称峰 5、样品与填料表面的溶化点 发生反应图 5、a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂 b、更改色谱柱 A、 峰拖尾 B、 峰前延 原因 解决方法 1、柱温低 1、升高柱温 2、样品溶剂选择不恰当 2、使用流动相作为样品溶剂 3、样品过载 3、降低样品含量 4、色谱柱损坏 4、见 Al、A2 C、 峰分叉 原因 解决方法 保护柱或分析柱污染 1、取下保护柱再进行分析。如果必要 更换保护柱。如果分析柱阻塞，拆下来 清洗。如果问题仍然存在，可能是柱子 被强保留物质污染，运用适当的再生措 施。如果问题仍然存在，入口可能被阻 塞，更换筛板或更换色谱柱。 2、样品溶剂不溶于流动相 2、改变样品溶剂。如果可能采取流动 相作为样品溶剂。 D、 峰变形 原因 解决方法 1、样品过载 1、减少样品载量 E、早出的峰变形 原因 解决方法 1、样品溶剂选择不恰当 1、a、减少进样体积 b、运用低极性样品溶剂 F、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰 原因 解决方法 1、柱外效应 1、a、调整系统连接（使用更短、内径 更小的管路） b、使用小体积的流通池 G、 K，增加时，脱尾更严重 原因 解决方法 1、二级保留效应，反相模式 1、a、加入三乙胺（或碱性样品） b、加入乙酸（或酸性样品） C、加入盐或缓冲剂（或离子化样品） d、更换一支柱子 2、二级保留效应，正相模式 2、a、加入三乙胺（或碱性样品） b、加入乙酸（或酸性样品） C、加入水（或多官能团化合物） d、试用另一种方法 3、二级保留效应，离子对 3、加入三乙胺（或碱性样品） H、酸性或碱性化合物的峰拖尾 原因 解决方法 1、缓冲不合适 1、a、使用浓度50-100mM的缓冲液 b、使用Pka等于流动相PH值的缓 冲液 I、 额外的峰 原因 解决方法 1、样品中有其他组份 1、正常 2、前一次进样的洗脱峰 2、a、增加运行时间或梯度斜率 b、提高流速 3、空位或鬼峰 3、a、检查流动相是否纯净 b、使用流动相作为样品溶剂 C、减少进样体积 J、保留时间波动 原因 解决方法 1、温控不当 1、调好柱温 2、流动相组分变化 2、防止变化（蒸发、反应等） 3、色谱柱没有平衡 3、在每一次运行之前给予足够的时间 平衡色谱柱