FOXP3和GITR在口腔扁平苔藓中的表达及意义

KXP3和GHR在口腔扁平苔薛中的表达及意义 作者臧磊漆明刘丽韩恩善李国富 【摘要】目的研究KKP3. GHR在口腔扁平苔薛0U组织中的 表达及其意义。方法采用免疫组化方法检测30例CEP组织和15例 口腔正常黏膜 NM组织中KKP3. GHR的表达。结果NMS KXP3 和GHR均阴性表达;OLP组IOCP3和GHR表达分别较 增加 跪It; 0. 01; KKP3和GHR在CEP组中的表达存在正相关关系。结 论OLP患者RKP3和GHR呈现高表达，二者可能参与了 CEP的发病。 【关键词】口腔扁平苔薛；KKP3; GHR 口腔扁平苔薛oral lichen planus, CIp是一种常见的口腔黏膜 疾病，其发病可能与精神因素、胃炎及自身免疫有关fflo调节性T 细胞regulatoryleIls, Treg在维持机体免疫耐受状态，防止自 身免疫疾病发生、抗移植物排斥以及肿瘤免疫中发挥重要作用2］。 叉头状转录因子 3 forkhead transcription facter3, FCKP3是特 异性表达于调节性T细胞内的标志性分子。糖皮质激素诱导的肿瘤坏 死因子受体glucocorticoidinduced tumor necrosis factor receptor, GHX是调节性T细胞上的一个表面分子，具有许多重要 的生物学活性，如参与细胞的增殖、分化和存活等。本研究采用免疫 组化方法检测了 KXP3和GITR在口腔正常黏膜al oral mucosa, NN和CEP组织中的表达，探讨KXP3和GHR在CEP发病中的作用。 1材料与方法 1. 1研究对象 1. 1- 1健康对照组15例组织来自于自愿捐献者的颊黏 膜，其中男6例，女9例，年龄21 〜57岁，均无系统性疾病，肝肾 功能正常。 1. 1. 2 CEP患者组30例CEP组织标本来自于宁夏医科大学附 属医院口腔科门诊初次就诊者的未糜烂颊黏膜，均经病理诊断，其中 男11例，女19例，年龄27〜63岁，均未使用过激素类药物或免疫 调节剂。 1. 2主要试剂兔抗人IOCP3多克隆抗体、兔抗人GHR多克隆 抗体侬缩型，北京博奥森公司），W9001免疫组化试剂盒、如显色 试剂盒4匕京中杉公司）。 1. 3方法采用免疫组织化学染色PV9001法检测KKP3和GHR 的表达强度，具体操作步骤如下切取争m厚切片60C烤片过夜； 脱蜡水化;抗原修复枸椽酸缓冲液高温高压修复，自然凉至室温， PBS洗5min, 3次；3湛02去离子水孵育ICtain,以阻断内源性过氧 化物酶，PBS洗5min, 3次;一抗孵育，4C过夜;复温2Cmin, PBS洗 5min, 3次;滴加试剂1聚合物辅助剂），室温2Chiin, PBS洗5min, 3次;滴加试剂2辣根酶标记抗兔1多聚体），室温2Chiin, PBS洗 5min, 3次；D安显色，镜下观察结果，适时终止;复染，封片。实验 均设不加一抗的阴性对照。所有实验标本均经石蜡包埋，切片，HE 染色检查。 1. 4结果判定RKP3和GHR染色的阳性信号为胞浆出现棕黄 色颗粒。结合染色强度和阳性细胞数分级。选取表达最强的部位，按 着色程度分级基本未着色，染色与背景相似者为0分;着色浅、略 高于背景者为1分;中度着色，明显高于背景者为2分;强染，着色深 棕色为3分。视野下阳性细胞数lt; 5柄0分，盼2琛1分，26济 2分，51冷75柄3分，跑t; 75柄4分。二项计分相加后分为 4级CK 1分为0 , 2分为（0 , 3分为（H） , 4分以上为（H-0 , 及以上判定为阳性。 1. 5统计学方法应用统计分析软件SPSS 11. 5进行统计分析， 等级资料采用Wi Icoxon秩和检验，相关分析采用Spearman相关分析 法。 2结果 2. 1 KXP3. GHR在口腔正常黏膜和口腔扁平苔薛组织中的表 达情况 KKP3免疫组化染色结果图1,见插页饥 GHR免疫组化染 色结果图2,见插页4o结果显示R1CP3和GHR在表达，在 CIP中RKP3和GHR高表达，见表L IO邸在KWR CEP组织中表 达情况经Wilcoxon秩和检验，1.464 Plt; 0. 01,差异有统计学 意义；GHR在NM和CEP组织中表达情况经Wilcoxon秩和检验， A5. 509, Kelt; 0. 01,差异有统计学意义。 2. 2 GWD KKP3表达程度的相关性 KKP3的表达与GHR表达呈明显正相关，f0- 537, Kelt; 0. 01, 见表2,即二者在CLP中的表达水平有同时增强或减弱的趋势。表1 KKP3. GHR在口腔正常黏膜和扁平苔薛组织中的表达例数 3讨论 QLP是一种常见的口腔黏膜疾病，病变可呈条纹状、斑块状白 色损害以及糜烂、萎缩等多种表现，以基底细胞液化变性和固有层炎 性细胞浸润为主要病理特征。尽管CEP的病因不明确，但许多证据表 明OLP是一种由T细胞介导的自身免疫性疾病囹，辅助性T细胞和 调节性老田胞是否平衡是CEP发病的一个决定因素。调节性T细胞是 一种具有免疫调节功能的特定细胞亚群，能够抑制自我反应性E田胞 的活化及功能，在维持外周免疫耐受中起至关重要的作用，其天然表 型为 CE4-KD2KKPM 2001年Brunkow等 囹首次报道F3CP3是CD4CD2油节性T 细胞发育的一个关键转录因子，在调节性老田胞的发育及发挥免疫抑 制效应中起着决定性作用『刃。F3CP3在调节性T细胞发育中起重 要作用的证据是在Scurfy小鼠和KKP3剔除小鼠体内，通过逆转录 病毒转染小鼠初始T细胞使其表达KKP3,继而可以表达与自然产生 的调节性T细胞相似的细胞表型，进而能阻止淋巴细胞增殖病四。 现有研究证明CWCD2酒g冲细胞是一种具有免疫调节作用的细 胞，在自身免疫性疾病和移植物抗宿主病中起重要的作用H;免疫失 调性基因疾病、多发性内分泌腺体病、小肠免疫性疾病、对目关综合 征（IPW均由基因突变所致［1QJ；多种自身免疫病，如幼年特 发性关节炎、自身免疫性胃炎、I型糖尿病、多发性硬化症等均由 KKP3的表达降低或功能缺陷引起［11］;说明FOCP3对正常免疫功能 的维持和调控起着重要的作用。最近有研究表明，1＜廉3的表达与疾 病病变的活动度成负相关，这些病变包括系统性红斑狼疮、结核分枝 杆菌、实验性重症肌无力和格林巴利综合征等炎症和自身免疫性疾病 ［12］。本研究结果显示K区P3在表达，在CIP中FOCP3高表达， 与 ETao等［1司免疫组化染色结果相符，在CLP中F3CP3表达率为 76. 6高于NM. Welt; 0. 01,可能是由于CIP处于不同程度的活 动期和不同的临床分型,导致了 叫3的表达增高。有文献报道KKP3 在多种肿瘤细胞中高表达，而CEP又被定为可能的癌前状态，这也可 能是KXP3在CEP中过高表达的原因。 GHR是肿瘤坏死因子受体超家族中的第18个成员，2002年发 现GHR持续高水平表达于天然调节性T细胞表面，并能消除调节性 T细胞的免疫抑制作用。随后的研究显示