卫生化学实验总结预防医学

ICP发射光谱测头发样品中的元素 【试剂和仪器】 中性洗发液、丙酮、无水乙醇、混合酸、去离子水，钙铁锌标准品。 100ml烧杯2只，10ml比色管1个，玻璃棒，剪刀，电子天平，烘箱，滤纸。 日本岛津公司ICPS-7000型电感耦合等离子体原子发射光谱仪，高纯氩气，通风装置，循环水系统，容量瓶，移液管。 【实验步骤】 1、消化处理 采样后枕部头发距头皮13cm（为了反映近期金属元素蓄积的情况）样品量约为。 洗涤中性洗发液洗涤→蒸馏水洗净（约3-5遍）→去离子水洗至无泡沫→淋干后放在丙酮中浸泡2min（去除有机污染物）→ 无水乙醇中浸泡1min→ 滤干→110℃干燥箱中干燥 消化精称取样品左右→混合酸5ml（10min）→电炉上徐徐加热（120℃左右）→溶液由棕褐色变至淡黄色，加大火，200℃左右赶酸（小于1ml为宜）。若为较深的黄色，则继续加数滴混合酸（完全冷却后）电炉上加热直至残渣为白色时消化完成。 注混合酸是为了增加氧化性（硝酸高氯酸41，适用于含钙较高的材料）；所有试剂为优级纯 稀释1HNO3溶解后→去离子水少量多次（至少3次）将样品转移至10ml容量瓶中定容，摇匀。贴签备用（注吸取硝酸和搅拌的吸管用两根，避免损失及污染） 2、仪器基本操作方法 （1）打开主机电源，预热3h以上。 （2）打开循环水装置，接通氩气，打开通风罩。 （3）打开电脑，进入ICPS操作系统，首先观察仪器状态是否正常，点燃距焰，（此时毛细管不能空吸）吸入空白溶液，进行波长校正（通常使用O/C/Ar）。S50，表示误差在允许范围内，若S50,应重复校正一次。 （4）然后建立新文件（make new card→命名→定性or定量→设一些参数,如测量次数，为3次，最后取平均值→选要测的元素→选波长→设置测量条件，采用人工方法进样，将样品提升时间设为0→设置标准系列样品浓度），根据测量需要设定条件。 （5）测定标准系列和样品。 （6）测定结束后，应先关闭氩气阀门，待距焰熄灭后，再关闭电源。 3、 标准曲线的绘制 （1） 首先用浓度最高的混合标准溶液测定ATT值（告诉仪器最高浓度是多少，测完之后用纯水洗一下），然后依次测定不同浓度混合标准溶液中各元素的发射强度，测量结束后，仪器自动绘出标准曲线。 4、 发样的测定 用与标准系列同样方法测定光强度，然后从标准曲线上查出发样中各元素含量。若某种元素浓度超过最高浓度限值，要进行稀释。 【结果及公式】 以c为横坐标，原子发射谱线强度（）为纵坐标，根据样品中各元素的从标曲中得到其浓度cx 【注意事项】 器皿等玻璃器材不要随意放置，以免污染。 进样样品→毛细管→雾化器雾化→雾化室进一步雾化→炬管→光学系统 紫外分光光度法测定蛋白质的含量 【实验原理】 蛋白质分子结构中的酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，具有吸收紫外光的性质，其最大吸收波长为280nm左右。在一定实验条件下，蛋白质溶液的吸光度与其浓度符合Lambert–Beer定律，据此可对蛋白质进行定量分析。 结构光源→单色器→吸收池→检测器→显示系统 注此次试验用紫外光，所以选用石英比色杯。Q或者S表示石英的意思，放置时字母要朝同一个方向。比色杯为成对的，不能混用。 【实验步骤】 1.吸收光谱曲线的绘制 以生理盐水作参比，以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，从200～400nm扫描任一牛血清白蛋白标准液的吸收曲线并找出最大吸收波长（λmax）。 2.标准曲线的绘制 移取ml牛血清白蛋白标准应用液、、、和，分别置于10ml比色管中，用生理盐水稀释至刻度，摇匀。以生理盐水作参比，在λmax波长下测定吸光度，以溶液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。 3.未知蛋白质溶液的测定 准确移取血清样本，置于10ml比色管中，定容至刻度。以生理盐水作参比，在λmax波长下测定吸光度。 【实验结果】 CxC稀释倍数 其中Cx为待测蛋白质溶液的质量浓度； C为由标准曲线确定的被测溶液蛋白质的质量浓度 【注意事项】 1.由于蛋白质的紫外吸收峰常因溶液pH的改变而改变，测定时未知溶液与标准溶液的pH要一致。 2.紫外分光光度法测定蛋白质的准确度较差，其主要原因为不同蛋白质中酪氨酸和色氨酸的含量不同，使得不同蛋白质溶液在280nm的吸光系数也不同。样品中若含有核酸，可分别测定在280nm和260nm的吸光度值，用经验校正公式计算蛋白质的浓度。 蛋白质浓度A280 － A260 mg/mL 【仪器电脑操作】 仪器连接自检→光谱扫描（设置200～400nm高速扫描）→方法设置（选择λmax，多点，固定波长，改单位）→进行测定（输入号码和浓度，记录吸光度值） 荧光分析法测定尿中核黄素（VB2）含量 【实验原理】 核黄素（VB2）在一定波长的光波照射下发荧光。在PH67的溶液中荧光最强，在其他条件恒定时，荧光强度F与VB2浓度C成正比，即FKC；当PH11时荧光消失。 尿中共存物质干扰VB2的测定，需要将尿液通过硅镁吸附柱，使其中VB2被硅镁吸附柱吸附，再用洗脱液洗脱，测定洗脱液中VB2的荧光强度。采用标准曲线法进行测量。 光源（氙弧灯200800nm；高压汞灯卤钨灯一般用于荧光计）→分光系统（两个单色器，第一单色器在光栅和样品池之间用于选择发射波长；第二单色器位于样品池和检测器之间与激发光源成90以消除透过光影响，选择荧光波长）→样品池→检测器→显示系统 注比色皿四面光滑 【实验步骤】 1、 装柱 脱脂棉塞住吸附柱下端→硅镁吸附剂与蒸馏水混合装柱（约占柱长的2/3左右）→用双蒸水测试流速，控制流速在6080滴/分，柱内应无气泡。 2、 标准曲线的的绘制 标准液配制（L）取25mg/L的标储液1ml于50ml棕色容量瓶，定容混匀。 （1） 吸附取VB2标准应用液,,,,,，分别过柱，用1520ml热水（6070℃）淋洗柱子（去除共存杂质）。 （2） 洗脱将10ml比色管接在柱子下方，每个吸附柱中加入5ml洗脱液（洗脱VB2），待流尽后再用不足5ml的蒸馏水淋洗柱子，流出液一并盛入比色管中，双蒸水定容至10ml。混匀，避光保存。 （3） 测定 取任意标准管溶液，固定荧光波长535nm，在350500nm的波长范围内，测定不同激发光波长下的荧光强度，以激发光的波长为横坐标，荧光强度为纵坐标，绘制激发光谱，选择激发光波长（λex）。 固定激发波长λex，在450600nm的波长范围内，测定不同荧光波长下的荧光强度，以荧光波长为横坐标，荧光强度为纵坐标，绘制荧光光谱，选择荧光光波长（λem）。 在固定λex和λem的条件下，分别测定不同浓度标准溶液洗脱液中VB2的荧光强度，以VB2的浓度C为横坐标，相对荧光强度为纵坐标，挥之标准曲线。 注洗脱液（丙酮冰醋酸超纯水