葡萄组培脱毒育苗技术规程

ICS65.020.01 CCS B16 15 内蒙古自治区地方标准 DB 15/T XXXXXXXX 葡萄组培脱毒育苗技术规程 Technical code for tissue culture and detoxification of grape seedling （征求意见稿） - XX - XX 发布XXXX - XX - XX 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发 布 DBTEXT15/TTEXTXXXXTEXTXXXX I 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则第1部分标准化文件的结构和起草规则的规定 起草。 本文件由内蒙古农业大学提出。 本文件由内蒙古自治区果蔬标准化技术委员会（SAM/TC 25）归口。 本文件起草单位 内蒙古农业大学、 内蒙古电子信息职业技术学院、 内蒙古量蕴农业发展有限公司、 内蒙古自治区农牧业技术推广中心、 内蒙古嘉仕农业科技发展有限公司、 呼和浩特市果丰种养殖专业合 作社。 本文件主要起草人樊丽、王旭、李小燕、刘艳、谢岷、杨波、陆明、张敏、张璐、聂素平、刘刚、 董莉洁。 DBTEXT15/TTEXTXXXXTEXTXXXX 2 葡萄组培脱毒育苗技术规程 1范围 本文件规定了葡萄组培育苗过程中的外植体选择、热处理、外植体消毒、茎尖剥离、初代培养、增 殖培养、生根培养、病毒检测、炼苗移栽、苗木质量控制等内容。 本文件适用于葡萄组织培养脱毒育苗技术。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 15981消毒器械灭菌效果评价方法 NY 469葡萄苗木 NY/T 2377葡萄病毒检测技术规范 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 组培苗tissue culture seedling 根据植物细胞具有全能性理论，利用外植体，在无菌和适宜的人工条件下，培育的完整植株。 外植体explant 植物组织培养中作为离体培养材料的器官或组织的片段。 4外植体选择 选择品种纯正、生长势强、无病虫害的葡萄母株，采集带有腋芽的嫩茎35cm茎段作为外植体，采 样最佳时间为早上10点以前。 5热处理 采集的外植体插在装有营养液的三角瓶中，置于37℃条件下培养14h/d，25℃条件下培养10h/d，培 养20～30 d。 DBTEXT15/TTEXTXXXXTEXTXXXX 3 6外植体消毒 将外植体去除叶片和叶柄，剪成长度在3 cm左右的茎段。茎段用自来水冲洗15 min后，转入超净工 作台，用75酒精浸泡30 s，再用无菌水冲洗3遍，然后用10次氯酸钠溶液或0.1升汞溶液浸泡8～10 min（期间不断摇晃瓶子，使消毒液和茎段充分接触），最后用无菌蒸馏水冲洗5遍。消毒所用器械的 灭菌参照GB/T 15981。 7茎尖剥离 将灭菌后的茎段在灭菌的滤纸上吸干水分，置于解剖镜下，进行茎尖剥离。剥离出的茎尖大小为 0.30.5 mm。将剥离的茎尖快速接种于灭菌的初代培养基上。 8初代培养 初代培养基 基本培养基为MS培养基， 添加1.0 mg/L 6-苄氨基嘌呤， 0.05 mg α-萘乙酸， 20～30 g/L蔗糖， 5～7 g/L 琼脂粉，pH调至5.5～6.0。 培养条件 接种瓶苗置于温度20～25℃，湿度60～80，光照强度1500 lx～2000 lx，8 h光照，16 h黑暗。 9增殖培养 在培养50～60 d后，取高度为1 cm左右的葡萄新芽，将其转接到增殖培养基上。 增殖培养基 基本培养基为MS培养基， 添加1.0 mg/L 6-苄氨基嘌呤， 0.1 mg α-萘乙酸， 2.0 mg/L PVP， 20～30 g/L 蔗糖，5～7 g/L琼脂粉，pH调至5.5～6.0。 培养条件 接种瓶苗置于温度20～25℃，湿度60～80，光照强度2000 lx～2500 lx，12 h光照，12 h黑暗。 10生根培养 当继代培养的组培苗高约2 cm时，即可将其转接到生根培养基上。 生根培养基 基本培养基为1/2MS培养基，添加0.2 mg α-萘乙酸，0.2 g/L 活性炭，20～30 g/L蔗糖，5～7 g/L琼 脂粉，pH调至5.5～6.0。 培养条件 DBTEXT15/TTEXTXXXXTEXTXXXX 4 接种瓶苗置于温度20～25℃，湿度60～80，光照强度2000 lx～2500 lx，16 h光照，8 h黑暗。 11病毒检测 经过脱毒处理的葡萄组培苗长至8～10 cm时，对其进行病毒检测，检测病毒种类及检测方法参照 NY/T 2377的规定。检测结果为阴性时，确定该植株为葡萄组培脱毒苗。 12炼苗移栽 炼苗 当根的长度达到1.0cm左右时，将生根良好的试管苗转移到室温条件下放置5～7 d，然后打开瓶盖 继续放置2～4 d。 移栽 移栽时，将组培苗根部附着的培养基清洗干净，移入装有基质的穴盘中。移栽在晴天的傍晚或阴天 进行。 水肥管理 移栽7 d内， 保证土壤持水量在70 ～90 ， 每天喷雾浇水2次。 7 d～14 d， 保证土壤持水量在50 ～ 70 。之后的水肥管理按葡萄正常管理进行。 13苗木质量控制 苗木质量标准、检测方法、出圃、包装等参照NY 469执行。