马铃薯茎尖脱毒新技术（病毒钝化）操作规程

ICS 点击此处添加中国标准文献分类号 DB15 内蒙古自治区地方标准 DB 15/T 马铃薯茎尖脱毒新技术（病毒钝化）规程 New technology for potato shoot tips detoxification（the virus passivation）operating instruction （征求意见稿） - - 发布 - - 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发 布 DB 15/T I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020 标准化工作导则 第 1 部分标准化文件的结构和起草规则的规定 起草。 本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。 本文件由内蒙古自治区马铃薯生产与种植标准化技术委员会（SAM/TC42）归口。 本文件起草单位内蒙古自治区农牧业技术推广中心、内蒙古自治区农牧业科学院、内蒙古农业大 学。 本文件主要起草人梁东超、苏敏莉、赵远征、王东、李倩、张龙梅、孙宇燕、张素青、郝文胜、 李树生、邓澍、慕安琪、多利娜、林艺馨、张润茗、张超、赵倩、梁炳鲲。 DB 15/T 1 马铃薯茎尖脱毒新技术（病毒钝化）规程 1 范围 本文件规定了马铃薯茎尖脱毒技术的术语与定义、 材料选择、 催芽处理、 材料消毒、 资源材料保存、 病毒钝化的技术和方法。 本文件适用于内蒙古马铃薯主产区的脱毒苗生产。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 29375-2012 马铃薯脱毒试管苗繁育技术规程 3 术语与定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 茎尖脱毒 shoot tip detoxification 根据病毒在植株体内分布不均匀性及越靠近新生组织部位 （如茎尖和根尖顶端生长点、 新生芽的生 长锥等处）病毒含量越少的原理，通过剥取茎尖分生组织进行培养获得脱毒植株。 3.2 病毒钝化 virus inactivation 病毒在一定条件下（高温、抗病毒药剂）出现不侵染植株或已侵染植株缓慢。 4 材料选择 选择具有品种典型特性、生长健壮，无明显病症的单株作为脱毒基础材料。 5 催芽处理 将入选材料打破休眠，通过自然发芽，散光晾晒，待顶芽生长至 2～3 cm 时待用。 6 材料消毒 DB 15/T 2 取 1 cm 顶芽放入器皿中，自来水冲洗 30 min 后用 75 酒精浸泡 10 s，无菌水冲洗 3 次，再用 5 次氯酸钠溶液浸泡 15 min，无菌水冲洗 3 次，放在已灭菌的培养皿中待用。 7 资源材料保存 在超净工作台上， 将消毒处理过的材料接入 MS 培养基中， 25 ℃条件下， 光照/黑暗交替 12 h、 3000 LX 下培养、保存。 8 病毒钝化 8.1 培养基配制 选择合适的培养基是茎尖培养成功与否的关键，参照 GB/T 29375-2012 马铃薯脱毒试管苗繁育技 术规程，配制 MS6-BA 0.2 ppmNAA 0.05 ppm病毒唑注射液 40 mg/kg，pH 5.8 的钝化培养基组合。 8.2 接种 将保存苗的顶端部分 1 cm 组织接入钝化培养基中培养。 8.3 高温钝化 将钝化培养基中的薯苗正常培养 7 d 后，放入 37 ℃条件下，弱光 1500 LX 条件下培养，诱导内源 生长素产生，使苗徒长，钝化病毒，增大无毒区间。 8.4 脱毒 经高温处理 15 d 后的材料，取其顶芽 1 mm 接入普通 MS 培养基中，25℃条件下，光照 12 h，3000 LX 进行培养。 8.5 扩繁、病毒检测 待苗长出 4～5 个叶片时，按单节切段，进行扩繁，用于病毒检测。