太子参药材的HPCE指纹谱分析

太子参药材的HPCE指纹谱分析 【摘要】 目的建立太子参的HPCE指纹图谱分析方法，为太子参质量评价提供依据。方法采用75 μm50 cm毛细管柱，50 mmol/L硼砂溶液作缓冲液，运行电压为20 kV，检测波长为200 nm。结果初步建立了以10个共有峰为特征指纹信息的HPCE指纹图谱。结论 HPCE指纹图谱法可用于太子参的质量评价。 【关键词】 太子参；高效毛细管电泳法； 指纹图谱 AbstractObjectiveTo establish the analytical for the fingerprint of Radix Pseudostellariae by HPCE and provide the basis for quality assessment of the crude was pered on a 75 μm50 cm uncoated capillary with 50mmol/L borate solution as CE buffer. The run voltage was 20kV and the UV detection was set at 200 HPCE fingerprint of 10 main peaks was established can be used for quality control of Radix Pseudostellariae. Key wordsRadix Pseudostellariae； HPCE； Fingerprint 太子参为常用中药，具益气健脾、生津润肺之功效，近年来在治疗肝炎、糖尿病、冠心病、心绞痛、继发性再生障碍性贫血、白细胞减少症、甲亢、淋巴结核等疑难病症及保健品研制开发方面取得了新进展，其用量速增。太子参主产于江苏，近十多年来，由于原药材市场需求量逐年加大，安徽、福建和贵州等地也开始大面积栽培太子参，随着太子参栽培地区扩大，流通品系增多，药材的内在质量控制以及发展道地药材的生产已成为当务之急。本文在对太子参HPLC，GCMS指纹谱研究［1，2］的基础上，采用高效毛细管电泳法对太子参指纹图谱的构建进行了初步探讨，为太子参质量的综合评价和发展江苏道地药材生产提供资料。 1 仪器与试药 美国Agilent型高效毛细管电泳仪，包括惠普化学工作站，DAD检测器，自动进样器；AG285电子天平；KQ500E型超声波清洗器昆山市超声仪器有限公司。 硼砂，氢氧化钠，甲醇，配制缓冲溶液和供试品溶液所用的水均为纯净水。太子参药材除7号样品200410从贵州施秉产区购得外，其他样品均为200407～10由产区实地采集，栽培品，经笔者鉴定均为石竹科植物孩儿参Pseudostellaria heterophylla Miq. Pax ex Pax et Hoffm.的块根。见表1。表1 太子参样品产地 2 方法与结果 供试品的制备精密称取样品粗粉粉末 g，加入甲醇10 ml，超声提取1 h，抽滤后放于带塞试管中。用微孔滤膜滤过，滤液作为供试品。 电泳条件未涂层石英毛细管柱75 μm50 cm,有效长度50 cm；检测波长200 nm；压力进样20 mbar,20s；分离电压20 kV；毛细管温度30℃；运行缓冲液50 mmol/L硼砂。毛细管使用前以1mol/L氢氧化钠溶液，重蒸馏水和运行缓冲液依次通过压力冲洗5，5，5 min。上述试剂使用前均经 μm滤膜滤过。 方法学考察 稳定性实验 取同一批次供试品溶液，分别在0，4，8，16，24，36 h测定指纹图谱，用“中药指纹图谱相似度计算软件”计算，结果相似度均大于，说明供试品在测定的36 h内保持稳定。 精密度实验 取同一批次供试品溶液，连续进样5次，测定指纹图谱，考查进样精密度，用“中药指纹图谱相似度计算软件”计算，结果相似度均大于，说明供试品进样精密度良好。 重现性实验取样品4，按供试品制备方法分别制备5份供试品，测定指纹图谱，用“中药指纹图谱相似度计算软件”计算，结果相似度均大于，表明本法测定的重现性较好。 以上结果表明指纹图谱中各色谱峰的相对迁移时间和峰面积基本一致，相似度较高，符合指纹图谱研究的的技术要求。 指纹图谱的建立将供试品溶液分别放入自动进样的样品管中，按选定的测试条件，进行检测。同一上述实验条件下，测定所有供试品HPCE色谱图。根据10批次供试品测定结果所给出的峰数、峰值和峰位等相关参数，进行分析、比较，制定优化的指纹图谱。见图1～2。 指纹图谱分析与评价 共有指纹峰标定经比较所有测定和记录的毛细管电泳图谱，选取其中10个共有峰作为指纹图谱的特征峰。以7号峰为参照峰，分别计算10批样品中共有峰的相对迁移时间平均值。太子参毛细管电泳指纹图谱中1～10号共有峰相对迁移时间依次为，，，，，，，，，。 共有指纹峰面积比 以7号峰为参照峰，计算10批样品共有峰的相对峰面积。结果见表2。表2 太子参毛细管电泳指纹图谱中共有峰的相对峰面积 相似度评价将测试数据导入国家药典委员会“中药指纹图谱相似度评价系统” 软件，经校正，将谱峰自动匹配，然后生成对照图谱，进行谱峰差异性评价和整体相似性评价。通过中药指纹图谱相似度计算软件得出太子参HPCE指纹谱共有模式R；与共有模式比较，10批不同产地太子参的相似度分别为，，，，，，，，，。 3 讨论 3. 1 不同提取方法的考察取同样量的太子参样品，依次用索氏提取法、超声波提取法和煎煮法提取并制成供试品溶液，进行HPCE分析，结果表明，以出峰数目为考察指标，索氏提取法和超声提取法效果较佳，由于超声波法简便、省时，故本实验选用超声波法制备供试品溶液。 电泳条件的选择 缓冲液浓度的选择在选定硼砂作缓冲液基础上，考察了不同缓冲液浓度20，30，40，50，60 mmol/L对分离度的影响，发现随着缓冲液浓度的增加，分析时间延长；适当提高缓冲液浓度有利于分离。经比较，选择50 mmol/L硼砂缓冲液为宜。 检测波长的确立 采用二极管阵列检测器对检测波长进行考察，记录并比较不同波长的色谱图，结果在200 nm检测波长下，色谱图中色谱峰较多，信息丰富，故选择200 nm为检测波长。 柱温的影响考察了15，20，25，30，35℃时对分离的影响，发现随着柱温的降低，分析时间延长。而温度过高时，分离度反而降低，综合考虑以上情况，最后选择分离温度30℃。 电压的影响考察了不同电压15，18，20，22，25，30 kV对分离度的影响，发现随着分离电压的增加，使得迁移时间缩短，柱效提高；电压过高柱效反而降低，不利于组分分离，综合考虑，选择分离电压20 kV。 3. 3 在目前太子参活性成分或指标性化学成分尚不是十分清楚的情况下，制定指纹图谱时，没有适宜的对照品或内标物作为参照物，故初步以供试品中峰面积相对较大、较稳定的共有峰作参照峰，来标定其它各共有指纹峰的相对迁移时间及计算其它各共有指纹峰面积的比值