S0P_05-8微生物学检验质量管理的标准操作程序

S0P_05-8微生物学检验质量管理的标准操作程序 一、目的确保仪器止常运转与结果的准确性，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠 的结果报告C 二、适用范I韦I微生物检验项目的质控。 三、操作人员检验科授权工作人员。 四、操作步骤 1分析前的质量控制 1.1人员培训 （1）.从事微生物检验的工作人员必须有微生物学的基础理论和基本技能，具有高度的敬业 精神。专业主管必须经过微生物检验专业培训（或进修）C （2）.微生物检验连续性较强，结果的判读需要具有较强的主观判断能力，因此要求微生物 检验的工作人员在一定时间内相对固定，且每个工作人员必须具备独立处理各类微生 物检验标本的能力。 （3）.专业主管负责规划及落实本专业的发展计划及质量方针，制定本专业的质量手册，组 织编写各检验项目的操作手册及仪器的操作手册（包括室内质控措施和要求），经常检 查执行情况，参加各级临床检验中心组织的室间质量评价活动。 1.2实验室设置 （1）.微生物检验实验室通常需划分成四个区域 第一区（无菌区）主要指无菌室；第二区（清洁区）包括办公室、洗浴室、储藏室、 培养基室等；第三区（中度危险区）通常指处理含致病力较弱的微生物标本的区域， 应考虑到出现烈性病原菌污染的可能；第四区（危险区）处理或研究致病力强的微生 物和传染性标本区域。本区包括结核杆菌及真菌实验室使用的生物安全罩。 （2）.微生物检验的基本仪器微生物实验室应具备以下主要仪器设备高压锅（干烤箱）、 培养箱（各种温度）、水浴箱、冰箱、低温冰箱（或冷冻柜）、厌氧培养箱（或厌氧装置）、 净化工作台（或生物安全罩）、显微镜、天平、离心机等；条件成熟时购置全自动血培 养仪和细菌鉴定仪。 （3）.微生物实验室的安全、消毒、防污染措施 1 .健全各项实验室安全防污染的规章制度，并严格监督执行。 1 .所有微生物实验室的培养物、传染性标本、废弃物均需高压灭菌后方可废弃 1 .实验室及操作台上均应装有紫外线消毒设备，定期行室内及工作台而的紫外线消毒。 1 .工作台而及地而在每个工作日结束后要用消毒液擦洗。 1.3仪器的校验每一台仪器设备应有专人负责，并建立仪器档案仪器设备名称、仪器型 号、生产厂家的名称和地址、仪器购置日期、保修期、操作手册、使用记录、故障及维 修记录等。常见仪器的校验方法 （1）.高压锅和干烤箱在杀灭和抑制病原微生物的各种方法中以热力灭菌最为可靠，且应 用最普遍。应由受过培训人员操作，因为灭菌效果与准确使用有关，并受内容物的密 度、相对尺寸及放置部位的影响。灭菌效果的监测方法高压锅用嗜热脂肪杆菌芽胞 片或安甑作监视指标；干烤箱用枯草芽胞杆菌黑色变种的芽胞作监视指标。至少每月 进行一次灭菌效果检查。 2 ・培养箱、水浴箱、冰箱有温度控制要求的，应于每个工作日的早晨上班时查看并记 录温度，有偏差应及时校正，下班前应重新校正一次温度因为微生物生长是连续性的 并绘制温度控制图，不能校正应及时请维修工修理。培养箱、水浴箱允许在规定温度 0. 5C范围内，冷藏冰箱要求2〜8qC,低温冰箱-20C5C 1.4培养基的配制及选择在微生物检验中，培养基是否合格对检验结果的正确与否起着关 键性的作用所有的培养基包括商品培养基在临床使用前均须经过无菌试验和性能测 试。 仃培养基的配制配制培养基要做到以下几点 1 .成分来源各种成分来源可靠，不含有对目的菌生长的抑制剂，培养基配制用的水必 须用蒸憾水，而不能用口来水。 1 .pll值根据培养基的不同要求调整pH值，控制在最适pH值0.2以内。需要注意的是， 培养基在高压灭菌后其pll值可降低0. 1〜0.2,故在消毒前调节pll时应比实际需要pll高 0. 1 〜0.2。 1 .灭菌根据培养基所含成分及配制数量不同，选择不同的灭菌方式，既要达到灭菌目 的，又不破坏培养基成分。 1 .分装根据使用目的和要求决定分装量。 1 .每一批培养基配制均应有记录，并妥善保存。 2 .培养基的无菌试验每一批配好的培养基均须进行无菌试验，少于100个样本通常选取 5-10的量，如果配制大量培养基，则任意选取10个平板或管装培养基，在35C或其 他适宜的温度下隔夜培养。如培养基含有血液，则需再置于室温一天，以检查嗜冷菌。 即使做过无菌试验，接种时也要检查每个平板的可见菌落。 3 .培养基的性能测试每一批新制或新购的培养基，使用前均需用己知性能的库存菌种 进行性能测试培养基按目的不同可分为增菌培养基、选择性培养基、鉴定培养基。 下面是不同种类培养基性能测试的方法 增菌培养基应接种少量难以生长的细菌，在一定时间内观察增菌情况，细菌能生长的 最小接种浓度越小，说明增菌培养基性能越好。 选择性培养基要求目的菌生长良好，非目的菌被抑制。一般要求生长的目的菌的接种 量不可过多，较好的方法是将测试菌调成0. 5麦氏比浊浓度，再用0. 001ml 的标准接种环涂划在培养基上，观察菌落生长。 鉴定培养基应选择具有典型特征的菌株作性能试验。 1.5标本准备 仃标本采集的注意事项 1 .收集真正病灶处的标本，不得受到邻近区域微生物的污染。 1 .采用灭菌过的容器收集标本。 1 .收集足量的标本。 1 .不要直接以T-棉拭子运送标本至实验室。 1 .尽可能在患者服用抗生素或伤口局部治疗之前采集标本。 1 .不要在标本中添加任何防腐剂，以免干扰病原菌的分离。 1 .取原标本作直接涂片。 1 .装标本的容器应有适当的标示。 1 .收集标本时须小心，避免他人受到感染。 1 .在申请单上应提供患者的临床资料C 2.标本采集的方法、数量及运输正确采集标本是实验室取得正确结果的前捉，但对标 本采集的方法和时间、标本的来源，实验室常不能直接加以控制，实验室要指导医生 和护士正确采集标本。 A. 血液与骨髓 1 .通常采血部位为肘静脉，感染灶附近血管采血，可提高阳性率。切忌在滴注抗菌药物 的静脉处采集血标本。 1 .采血部位的局部皮肤应严格消毒，将采集的血液注入培养基前，应过火消毒针头。 1 .每次采血量成人为5〜10 ml,婴幼儿1-5 ml,培养基与血液之比以10 1为宜，以 稀释血液中的抗生素、抗体等抑菌或杀菌物质。 1 .选择体温上升时采血可提高阳性率。对己用抗菌药物而又不能停药者，应在下次用药 前米血C 1 .每例至少采血2次，间隔时间应根据病情而定，以利于提高阳性率和区别感染菌和皮肤 污染菌。 B. 尿液 1 尿液标本的采集和培养中最大的问题是污染菌，故应严格进行无菌操作。由于治疗药 物多数通过尿液排泄，因此，应在用药前采集尿液，且以晨起第一次尿送检为宜。尿培 养送检单上最好注明标本采集方法及抗生素使用情况。 1 .中段尿采集是临床上最常用的方法。采样前需用肥皂水和清水洗净尿道口，排出的 尿液前段应弃去，而将中段或近后段的尿液留于