4%多聚甲醛固定微生物样品的原理
4多聚甲醛固定微生物样品的原理 标本中大多数神经激素、肽类物质,以及蛋白质为水溶性,在用于探讨之前,常需固定, 即使其凝固以降低其水溶性。甲醛能与蛋白质的氨基反应,使蛋白质凝固,因此在医药上可做为检验时的组织固定剂、以及防腐剂等。在固定剂中,最常用的是多聚甲醛。 常用固定液固定剂品种许多,但大多属于醛类和醇类。其固定原理不同,各有优缺点。 醛类(常用甲醛、戊二醛和多聚甲醛) 醇类(常用乙醇) 其它 (丙酮) 1醛类 甲醛福尔马林应用最广 原理形成分子间的交联,影响蛋白构型而使之固定。 优点形态结构保存好,且穿透性强,组织收缩少。 缺点 甲醛放置过久可氧化为甲酸,使溶液pH降低,影响染色; 醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基,使抗原确定簇的三维构象出现空间障碍; 分子间交联形成的网格结构可能部分或完全掩盖某些抗原确定簇,使之不能充分暴露。可造成假阴性的染色结果。 留意事项 缩短固定时间,降低固定温度4C,为此组织块不宜过厚。 改用中性缓冲福尔马林,以pH值7.2~7.4 0.01mol/L的磷酸盐缓冲液配制成10%甲醛固定液,削减固定液pH的改变。 固定后充分水洗以削减分子间交联。 切片在作免疫组化染色前,先经预处理使抗原再现抗原修复。 戊二醛 穿透性强,微细结构保存好,但对抗原有肯定影响,常与其他固定剂联合用作免疫电镜固定液。 多聚甲醛常用4 可用于免疫电镜;也可用于免疫荧光染色。 主要检测组织内一些性能娇弱的抗原特殊是细胞表面抗原,例如各类淋巴细胸分化确定簇CD、主要组织相容性抗原等。 2醇类 最常用的醇类固定剂是乙醇。 其固定作用使细胞内蛋白、糖类发生沉淀。 优点穿透性强、抗原性保存好。 缺点 脱水性强,易引起组织收缩、变硬,影响切片质量,因而乙醇固定时间不宜过长2h内。 乙醇使蛋白变性的作用轻,固定后可再溶解;染色过程中,温育时间长,抗原可流失而减弱反应强度 3其它固定剂 丙酮 对抗原性的保存好,但脱水性更强,较少 用于组织标本,但细胞爬片常用丙酮固定。