3′―大豆苷元磺酸钠对四氯化碳所致小鼠肝损伤和肝药酶的影响

3′大豆苷元磺酸钠对四氯化碳所致小鼠肝损伤和肝药酶的影响 3 大豆苷元磺酸钠对四氯化碳所致小鼠肝损伤和肝药酶的影响 [摘要] 目 的 探讨 3 -大豆苷元磺酸钠（ 3 -DSS） 对四氯化碳（CCl4） 所致小鼠肝损伤的影响。 方法 取雄性昆明种小鼠 60 只， 每组12 只， 随机分为比照组、 模型组、 联苯双酯阳性比照组、 0. 1 mg/kg 3-DSS 组和 0. 3 mg/kg 3 -DSS 组。 每星期进行 2 次腹腔注射 10CCl4 植物油溶液 0. 1 ml/10 g， 造成慢性肝损伤模型， 期间赐予灌服 2. 5 mg/kg 联苯双酯、 0. 1 mg/kg 3 -DSS、 0. 3 mg/kg 3 -DSS， 持续 6 周， 给药结束后， 分别取血和肝脏， 分别血清， 制备肝均浆， 检测丙氨酸氨基转移酶（ALT）、 天冬氨酸氨基转移酶（AST） 的活性和肝药酶含量。 结果 与比照组比较， 模型组小鼠肝功能明显下降， ALT、 AST 水平明显上升， 肝药酶含量明显下降； 与模型组比较， 0. 1、 0. 3 mg/kg 3 -DSS 治疗组 ALT、 AST水平均有明显下降； 肝药酶含量也明显增加。 结论 3 -DSS 对 CCl4 所致小鼠肝损伤具有明显的爱护作用。 [关键词] 3 -大豆苷元磺酸钠； 肝损伤； 四氯化碳； 丙氨酸氨基转移酶； 天冬氨酸氨基转移酶； 肝药酶 [中图分类号] R-05 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）07（c） -0018-03 肝脏是人体最大的实质性器官， 担负着消化、 解毒、 分泌和生物合胜利能， 其功能障碍干脆影响人体健康， 甚至危及生命。 肝病的发病机制较 为困难， 涉及炎症反应、 免疫功能紊乱、 代谢障碍、 自由基损害及质膜损伤等多个生理病理过程。 对肝损伤的防治目前仍是全球医疗范围内极其重要的一个课题。 因此， 本探讨通过建立试验性肝损伤动物模型、 探讨肝病的发病机制， 筛选保肝药物， 探究其作用机制， 对于揭示肝损伤的生理病理改变和提高临床治疗水平具有特别重要的意义。 3 -大豆苷元磺酸钠（3 -daidzein sulfonate sodium， 3 -DSS）是中药葛根的主要有效成分大豆苷元结构修饰和改性的新合成的水溶性物质， 其化学结构式见图 1。 目前， 国内外对 3 -DSS 对肝损伤的爱护作用探讨尚未见报道。 有探讨结果显示， 3 -DSS 具有耐缺氧、 抗氧化、 抗心律失常及心肌缺血再灌注损伤再灌注损伤有爱护等作用[1-7] 。 本探讨拟通过检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、 天冬氨酸氨基转移酶（AST）的活性和肝药酶含量， 视察 3 -DSS 处理后对四氯化碳（CCl4） 诱导的小鼠肝损伤的爱护效应。 1 材料与方法 1. 1 试验动物 健康雄性昆明（Kunming） 小鼠， 体重（213） g， 购自湖南斯莱克景达试验动物有限公司， 动物许可证号 SCXK（湘） 2011-003， 合格证号 NO. 4304701590。 1. 2 试验药品 CCl4（分析纯， 江西洪都试剂化工厂生产）， 临用前与精制植物油混合配成 10（W/W） CCl4 植物油溶液； 3 -大豆苷元由沈阳药科高校植化教研室供应， 用生理盐水配成所需浓度； 联苯双酯滴丸购自北京协和药厂， 配成混悬液。 1. 3 仪器 BS224S 电子天平 （德国赛多利斯集团）； MIKRO22R 低速冷冻离心机 （杭州普瑞特仪器有限公司）； HS-B6 恒温水浴箱（湖北省黄石市医疗器械厂）；微量加样器（GILSON 公司、 Dragon Lab、 Eppendorf 公司）； 全自动生化分析仪检测（德国拜耳 1605 型）， 722N 可见光分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）。 1. 4 试验方法 按体重将小鼠随机分为 5 组， 每组 12 只， 分别为正常比照组、 模型组、 阳性药物比照组（2. 5 mg/kg 联苯双酯） 以及 0. 1、 0. 3 mg/kg 3 -DSS组， 正常组和模型组赐予生理盐水（0. 1 ml/10 g）， 每天按体重灌胃给药，给药剂量为 0. 1 ml/10 g， 此外每周二、 六除比照组外均进行腹腔注射10CCl4 植物油溶液 0. 1 ml/10 g， 并记录小鼠体重以及活动状况， 持续 6周。 另一组分组与给药同上， 连续给药 10 d。 末次给药后禁食过夜， 24 h后断头处死， 放尽血液并快速剖开腹腔， 用冷冻生理盐水冷却冲洗肝脏并取出， 称取肯定量的肝组织， 剪碎， 加 4 倍量冰冷的 15甘油-20 mmoL 磷酸盐缓冲液（PBS， pH 7. 4）， 用玻璃匀浆器匀浆， 4℃下用高速冷冻离心机以 9000g 离心 15 min， 得上清液。 采纳双缩脲法测定上清液蛋白质含量[8]。 在比色杯中加入 15甘油-20 mmoL PBS 2 ml 和上清液部分 0. 1 ml，混匀后加入数毫克保险粉并扫描 400～500 nm 的基线（调零）。 然后在比色杯中通入一氧化碳约 1 min， 静置 3 min， 再于 400～500 nm 处扫描样品得到肝药酶的汲取光谱曲线， 记录 420、 450、 490 nm 处的汲取度， 按 方法计算肝药酶含量[9]。 1. 5 标本采集 给药结束后 24 h， 取血， 室温静置 30 min 后， 12 000g 离心 10 min，取血清， -80℃保存， 用以检测 ALT、 AST[10]； 另一组取肝脏用以检测肝药酶含量。 1. 6 检测方法 采纳全自动生化分析仪检测血清中 ALT、 AST 检测； 采纳分光光度计测定小鼠肝药酶含量。 1. 7 统计学处理 采纳 SPSS 20. 0 统计学软件进行数据处理， 计量资料以均数标准差（xs） 表示， 组间比较采纳 t 检验， 以 P0. 05 为差异有统计学意义。 2 结果 2. 1 一般状况视察 在连续灌胃给药期间， 小鼠的皮毛光泽， 活动良好， 反应灵敏， 体重均有所增加。 腹腔注射 CCl4 的植物油溶液后， 除空白比照组外小鼠明显活动性减弱， 皮毛暗淡， 模型组的小鼠出现行动缓慢现象。 试验结束前，正常组小鼠活动正常， 皮毛色泽、 活动状况均良好， 模型组小鼠较为萎靡，活动状况显著减弱， 阳性药物组、 3 -DSS 组的皮毛略显粗糙， 活动状况一般。 2. 2 3 -DSS 对 CCl4 处理小鼠血清 ALT、 AST 的影响 结果显示 腹腔