DB53_T 1229-2024 暗褐脉柄牛肝菌菌种生产技术规程

ICS 65.020.01 CCS B05 53 云 南 省 地 方 标 准 DB53/T 12292024 暗褐脉柄牛肝菌菌种生产技术规程 2024 - 03 - 01 发布 2024 - 06 - 01 实施 云南省市场监督管理局 发 布 DB53/T 12292024 前 言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分标准化文件的结构和起草规则的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由景洪宏臻农业科技有限公司提出。 本文件由云南省农业标准化技术委员会（YNTC07）归口。 本文件起草单位景洪宏臻农业科技有限公司。 本文件主要起草人纪开萍、曹旸、纪光燕、王秋兰、罗顺珍、高丽霞、纪光玉、晏汐蓓、陶玲。 I DB53/T 12292024 暗褐脉柄牛肝菌菌种生产技术规程 1 范围 本文件规定了暗褐脉柄牛肝菌（Phlebopus portentosus （Berk. Broome）Boedijn）菌种的生 产条件、工艺流程、母种制备、药瓶液体菌种制备、发酵罐液体菌种制备、栽培种制备、记录与档案、 标志、包装、运输。 本文件适用于暗褐脉柄牛肝菌菌种生产。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 4806.7 食品安全国家标准 食品接触用塑料材料及制品 GB 5749 生活饮用水卫生标准 GB 14881 食品安全国家标准 食品生产通用卫生规范 GB 50073 洁净厂房设计规范 NY/T 528 食用菌菌种生产技术规程 DB53/T 491 暗褐网柄牛肝菌菌种 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 暗褐脉柄牛肝菌 phlebopus portentosus 又名暗褐网柄牛肝菌，拉丁文学名 Phlebopus portentosus Berk. Broome Boedijn，商品名 黑牛肝菌，隶属于牛肝菌目Boletales、小牛肝菌科Boletinellaceae、脉柄牛肝菌属Phlebopus。 3.2 暗褐脉柄牛肝菌菌种 phlebopus portentosus spawn 暗褐脉柄牛肝菌菌丝体及其生长基质组成的液体和（或）固体繁殖材料，包括母种、摇瓶液体菌种、 发酵罐液体菌种、栽培种。 3.3 母种 stock culture 经组织分离、菌种选育等方式获得的，以玻璃试管或培养皿为培养容器，培养基质为营养液添加琼 脂制成的固体培养基，具有结实性的菌丝体纯培养物及其继代培养物。 3.4 摇瓶液体菌种 conical flask liquid spawn 由母种扩繁而得的，以摇瓶为培养容器，培养基质为营养液，具有结实性的菌丝体纯培养物。 3.5 发酵罐液体菌种 fermenter liquid spawn 1 DB53/T 12292024 由摇瓶液体菌种扩繁而得的，以发酵罐为培养容器，培养基质为营养液，具有结实性的菌丝体纯培 养物。 3.6 栽培种 cultivated spawn 由母种、摇瓶液体菌种或发酵罐液体菌种等扩繁而得的，以一定容量的瓶子或袋子为培养容器，培 养基质为富含木质纤维素或谷物粒等天然有机物添加营养液，具有结实性的菌丝体纯培养物。 4 生产条件 4.1 人员 人员应符合GB 14881中的相关规定，并经专业技术培训后，掌握暗褐脉柄牛肝菌基础知识及暗褐脉 柄牛肝菌菌种生产技术规程。 4.2 生产环境 生产环境应符合NY/T 528中的相关要求。 4.3 设施 4.3.1 主要设施 主要设施包括原材料堆场、原材料库、培养基配制室、灭菌室、摇瓶接种室、摇瓶培养室、发酵罐 配料室、发酵罐冷却室、发酵罐接种室、发酵罐培养室、栽培种冷却室、栽培种接种室、栽培种培养室、 化验室等。 4.3.2 设施要求 设施应符合以下要求 a 地面应能防水、防腐蚀、防渗漏、防滑，易清洗，有适当的排水坡度（ 1.0～1.5）和良好 的排水系统，排水沟应是圆弧式的明沟； b 墙壁和天花板应能防潮、防霉、防水、易清洗； c 门窗应设置防蚊蝇纱网； d 入口处应设置洗手、消毒和干手、风淋等洁净设施，并设置二次更衣； e 设置有排气管道； f 设置与职工人数相适应的更衣室、浴室、厕所和工作休息室； g 净化操作区域应符合 GB 50073 中的相关要求； h 摇瓶接种室、摇瓶培养室、发酵罐配料室、发酵罐冷却室、发酵罐接种室、发酵罐培养室、 栽培种冷却室、栽培种接种室、栽培种培养室为万级无菌净化操作区域； i 开盖接种重点区域局部达到无菌级百级。 4.4 设备 4.4.1 生产设备 包括但不限于发电设备、调温设备、空气压缩机、空气过滤器、高压蒸汽灭菌锅、搅拌机、装瓶设 备、超净工作台、恒温回旋式振荡器、液体菌种发酵罐、接种设备等。 4.4.2 检验设备 2 DB53/T 12292024 恒温培养箱、冰箱、显微镜、磁力搅拌机、电子天平、pH计等。 4.5 器具 4.5.1 玻璃三角瓶 容量500 mL～1 000 mL，耐126 ℃高温，无色或近无色，配备硅胶塞。 4.5.2 聚丙烯塑料瓶 符合GB 4806.7的规定，容量1 400 mL～1 600 mL，可耐受126 ℃ , 无色或近无色，瓶口直径6 cm 9 cm，瓶盖应预留通气孔，并可夹垫海绵片或无纺布以防止培养期的污染。 4.5.3 其他 培养皿、接种铲/针、打孔器、试管、量杯、容量瓶、玻璃漏斗、定量定性滤纸等。 5 工艺流程 工艺流程为母种接种摇瓶培养摇瓶液体菌种接种发酵罐培养发酵罐液体菌种接种栽培 瓶培养栽培种。 6 母种制备 6.1 母种制备应符合 NY/T 528 的规定。 6.2 母种质量要求应符合 DB53/T 491 中的规定。 6.3 母种培养基配方可参照附录 A。 7 摇瓶液体菌种制备 7.1 培养基配制与分装 培养基配参见附录A。用水符合GB 5749要求， 以4.5.1中的玻璃三角瓶分装培养基，装液量不超过 三角瓶容量的60。 7.2 灭菌 灭菌温度121 ℃ , 灭菌时间30 mi